申请/专利权人：中国农业科学院作物科学研究所

申请日：2023-02-10

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN115918523B

主分类号：A01H1/02

分类号：A01H1/02;A01H5/10;A01H6/46;C12N15/82;C12N15/113;C12N15/55;C12N9/22;C12N9/12;C12N9/32;C07K14/415

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2023.04.25#实质审查的生效;2023.04.07#公开

摘要：本发明公开了一种不依赖于种子分选机的谷子智能不育系繁殖方法。所述方法为将育性基因编辑载体以及含智能不育连锁元件表达盒载体转入野生型谷子，得到谷子智能保持系；将该谷子智能保持系自交，得到谷子智能保持系自交种子，其中红颜色的自交种子为谷子智能保持系种子；黄颜色的自交种子为谷子智能不育系种子，通过裸眼即可区分；种植谷子智能保持系自交种子和谷子智能不育系种子，在田间通过人工辨别可育和不育植株单穗完成不育系和保持系的筛选；同时将不育系授以保持系花粉即可实现快速大量扩繁纯的不育系种子。由于谷子具有籽粒小、繁殖系数高、单位面积播种用种量少等特点，该方法可避免大规模种子分选步骤及对高精度种子分选机的依赖。

主权项：1.一种谷子智能不育系种子的繁殖方法，包括如下步骤：1）将用于创制谷子智能保持系的成套载体转入野生型谷子，得到转基因谷子，从所述转基因谷子中筛选得到谷子智能保持系；将所述谷子智能保持系自交，得到谷子智能保持系自交种子，其中，红颜色的谷子智能保持系自交种子为谷子智能保持系种子，黄颜色的谷子智能保持系自交种子为谷子智能不育系种子；2）种植所述谷子智能保持系自交种子和所述谷子智能不育系种子，其中，所述谷子智能保持系自交种子作为父本行，所述谷子智能不育系种子作为母本行；3）于开花期，在所述父本行中寻找并标记花药饱满且正常开裂散粉的雄性可育植株，该雄性可育植株即为谷子智能保持系，在所述母本行中标记花药干瘪或不开裂散粉的雄性不育植株，该雄性不育植株即为谷子智能不育系；4）经过开放授粉，从标记的雄性不育植株上收获种子，即为谷子智能不育系种子；所述用于创制谷子智能保持系的成套载体包括育性基因敲除载体和智能不育表达盒载体；所述育性基因为SiPKS2基因；所述育性基因敲除载体包括sgRNA表达盒和Cas9核酸酶表达盒；所述智能不育表达盒载体包括氨基糖苷磷酸转移酶表达盒、育性恢复基因表达盒、玉米α淀粉酶表达盒和甜菜红素表达盒；所述sgRNA的靶序列如序列表中序列2所示；所述Cas9核酸酶为氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；所述氨基糖苷磷酸转移酶为氨基酸序列是序列表中序列5所示的蛋白质；所述玉米α淀粉酶为氨基酸序列是序列表中序列6所示的蛋白质；所述甜菜红素表达盒表达蛋白A、蛋白B和蛋白C；所述蛋白A为氨基酸序列是序列表中序列7所示的蛋白质；所述蛋白B为氨基酸序列是序列表中序列8所示的蛋白质；所述蛋白C为氨基酸序列是序列表中序列9所示的蛋白质。

全文数据：

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