申请/专利权人：沈阳汇智细胞产业技术创新研究院有限公司

申请日：2022-07-16

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN115105636B

主分类号：A61L27/36

分类号：A61L27/36;A61L27/60;A61L15/42;A61L15/40

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2022.10.28#实质审查的生效;2022.09.27#公开

摘要：本发明公开了一种脱细胞人羊膜的制备方法，包括以下步骤：1取新鲜的人羊膜，浸泡于初步消毒溶液中；2依次用无菌水、次氯酸钠溶液、无菌水清洗；3浸入冻存溶液中，捞出，反复冻融两次；4置于TritonX‑100溶液中，摇床孵育，初步去除细胞；然后用PBS溶液震荡清洗羊膜；5置于脂肪酶溶液中，摇床孵育，以充分去除上皮细胞及其他杂质，然后用PBS溶液震荡清洗羊膜；6将羊膜平铺在硝酸纤维膜上，冷冻；7冷冻干燥至含水量为5％～7％。本发明的脱细胞人羊膜的制备方法，不使用物理方法刮擦羊膜，保证了原有的重要细胞因子含量，维持了组织学结构，无细胞毒性，DNA含量符合脱细胞标准。

主权项：1.一种脱细胞人羊膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取新鲜的人羊膜，浸泡于初步消毒溶液中，对羊膜进行初步消毒，并抑制细菌生长；（2）取出羊膜，用无菌水清洗，再用次氯酸钠溶液清洗，次氯酸钠溶液的浓度为0.05%，清洗时间为10分钟；再用无菌水清洗；（3）将清洗后的羊膜浸入冻存溶液中，捞出置于滤纸上，充分展开，再覆盖一层滤纸，反复冻融两次；反复冻融两次的具体操作为：置于-80℃环境下冻存1小时，然后置于37℃环境下融化0.5小时，再置于-80℃环境下冻存1小时，然后置于37℃环境下融化0.5小时；（4）将反复冻融后的羊膜置于1%的TritonX-100溶液中，摇床孵育，初步去除细胞，摇床的转速为70～100rpm，孵育温度为37℃，孵育时间为24小时；然后用PBS溶液震荡清洗羊膜，清洗的时间为10分钟；（5）将羊膜置于脂肪酶溶液中，摇床孵育，以充分去除上皮细胞及其他杂质，然后用PBS溶液震荡清洗羊膜；所述脂肪酶溶液的浓度为1000UL；摇床的转速为70～100rpm，孵育温度为37℃，孵育时间为24小时；（6）将羊膜平铺在硝酸纤维膜上，绒毛膜面朝向硝酸纤维膜，压在铁盘下，置于-40℃环境下冷冻10～15小时；（7）将冷冻的羊膜冷冻干燥至含水量为5%～7%。

全文数据：

权利要求：

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