申请/专利权人：浙江诸暨聚源生物技术有限公司

申请日：2023-12-18

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117740982A

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了一种重组Ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法。所述方法先对重组Ⅲ型胶原蛋白供试品进行胰蛋白酶酶解，再进行酸化处理，通过高效液相HPLC检测，对获得的重组Ⅲ型胶原蛋白肽图图谱与参比品进行比较分析，从而确定供试品的质量和结构。本发明方法可以有效地对由保藏编号为CGMCCNo.5021的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris发酵产生的重组Ⅲ型胶原蛋白进行鉴别分析，满足日常质量检测的要求。

主权项：1.重组Ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）供试品的溶解：将重组Ⅲ型胶原蛋白供试品用0.5%醋酸溶液溶解得到供试品溶液，所述的重组Ⅲ型胶原蛋白由保藏编号为CGMCCNo.5021的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris发酵产生；（2）胰蛋白酶酶解：取供试品溶液置于10kDa的超滤管中，加入pH=8.0、0.1molLTris-HCl溶液，离心10分钟，重复上述步骤2次，去除液体，保留超滤管中的供试品，然后在超滤管中加入pH=8.0、0.1molLTris-HCl溶液，反复吹打，加入胰蛋白酶溶液，充分振荡混匀，密封后于37℃反应7小时至完全酶解；（3）酸化处理：在酶解后的样品中加入10%甲酸进行酸化；（4）高效液相色谱检测：采用高效液相色谱，取酸化后的样品进样，得到供试品溶液的图谱，色谱条件如下：流动相A：含0.1%甲酸水溶液；流动相B：含0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.22mLmin；柱温：65℃；色谱柱：Shim-packArataPeptideCSHC18（粒径2.2μm，2.0×150mm）；检测波长：214nm；梯度洗脱程序为： 时间（min） A% B% 0 98 2 13 85 15 19 79 21 28 70 30 64 30 70 75 98 2 。

全文数据：

权利要求：

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