申请/专利权人：江苏省血液中心

申请日：2020-04-10

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN111455027B

主分类号：C12Q1/6837

分类号：C12Q1/6837;C12Q1/6888

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2024.03.15#著录事项变更;2020.08.21#实质审查的生效;2020.07.28#公开

摘要：本发明公开了一种人血小板抗原基因分型的质谱检测方法及试剂盒。本申请采用飞行时间质谱平台，基于核酸分子在电场中飞行时间与离子质量成反比，通过检测核酸分子在真空中的飞行时间而获得样品分析物的精准分子量，从而检测出HPA1～29SNP突变位点信息。结合多重PCR技术、单碱基延伸技术以及基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术进行分型检测。采用本申请的检测方法、引物和试剂盒，能够对29个血小板抗原HPA‑1～29基因多态性位点进行检测。检测方法准确、稳定。

主权项：1.一种血小板抗原基因分型的质谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：1准备待测DNA；2提供所有靶点SNP的扩增引物，使用多重PCR技术扩增含有目的SNP的DNA序列；3对步骤2获得的扩增引物用碱性磷酸酶进行纯化处理，除去未结合的dNTPs；4提供每个靶点SNP延伸引物，将混合好的延伸引物加入步骤3纯化后的产物中，以ddNTP为底物，进行单碱基延伸，每个SNP的等位基因延伸产物仅为末端一个碱基的差异；5纯化步骤4获得的单碱基延伸的产物，并将产物转移到SpectroCHIP芯片上，进行质谱检测，确定其基因型；PCR反应体系为：每个PCR孔中加入0.5μmolLPCR引物工作液1.0μL，RNase-freeWater0.8μL，含15mmolLMg2+的10×Buffer0.5μL,25mmolLMgCl20.4μL，25mmolLdNTP0.1μL，5UμLHotstarTaq0.2μL；PCR程序为：一个循环95℃，2min；45个循环95℃，30sec；56℃，30sec，72℃，1min；72℃，保持5min，12℃；所述扩增引物包括正向引物和反向引物，正向引物、反向引物和延伸引物的序列如下表所示：

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省血液中心 血小板抗原基因分型的质谱检测方法及试剂盒

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