申请/专利权人：武汉市农业科学院

申请日：2022-03-28

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN114836462B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H5/00;A01H6/34;A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2022.08.19#实质审查的生效;2022.08.02#公开

摘要：一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法，包括：S1、选种消毒后接种于种子发芽培养基MeM1上暗培养，备用；S2、用农杆菌浸染培养基IM悬浮菌液将经步骤S1生长健壮的甜瓜苗上切除的子叶外植体进行浸染，最后将浸染的子叶外植体置入农杆菌共培养基MeM2上共培养，备用；S3、将经步骤S2共培养后的子叶外植体置于诱导芽再生培养基MeM3上培养，每两周继代一次，备用；S4、将步骤S3培养基上再生的芽丛切下置于芽延长培养基MeM4中继续筛选培养，直到芽延长至2cm后转移到生根培养基中；S5、将经步骤S4获得的芽转移至生根培养基MeM5上生长，之后转移至营养钵内培养；优点是：同时适用于薄皮甜瓜、厚皮甜瓜，并使得再生芽的黄化率低至1.6％。

主权项：1.一种农杆菌介导甜瓜遗传转化方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、选种消毒后接种于种子发芽培养基MeM1上暗培养，备用；S2、用农杆菌浸染培养基IM悬浮菌液将经步骤S1生长健壮的甜瓜苗上切除的子叶外植体进行浸染，最后将浸染的子叶外植体置入农杆菌共培养基MeM2上共培养，备用；S3、将经步骤S2共培养后的子叶外植体置于诱导芽再生培养基MeM3上培养，每两周继代一次，备用；S4、将步骤S3培养基上再生的芽丛切下置于芽延长培养基MeM4中继续筛选培养，直到芽延长至2cm后转移到生根培养基中；S5、将经步骤S4获得的芽转移至生根培养基MeM5上生长，之后转移至营养钵内培养；其中，每100mL农杆菌浸染培养基IM的制备过程为：取MS成品粉末0.44g、蔗糖3g、200μl1mgml6-BA、100μL1mgmlABA、0.27gMES、调节pH值至5.45～5.55，灭菌后待温度降低为50℃加入100μmolAS200μL，混合均匀；每100mL种子发芽培养基MeM1的配制：MS成品粉末0.44g，蔗糖3g，琼脂粉0.9g，双蒸水定容100mL，调节pH值5.80-5.85，高温灭菌后待温度降低为55℃，加入50μL200mgmL通用型抑制剂，混合均匀；每100mL农杆菌共培养基MeM2的配制：MS成品粉末0.44g，蔗糖3g，琼脂粉0.9g，双蒸水定容100mL，调节pH值5.70-5.75，高温灭菌后待温度降低为55℃加入100μmoLAS100μL，混合均匀；每100mL诱导芽再生培养基MeM3的制备过程为：取MS成品粉末0.44g、蔗糖3g、琼脂粉0.9g、0.75～1.25mgLCuSO4·5H2O、植物生长调节剂的组成为0.5～0.8mg·L-16-BA+0.5～0.8mg·L-1玉米素+0.08mg·L-1IAA，双蒸水定容至100mL，调节pH值5.80-5.85，灭菌后待温度降低为55℃加入100微升200mgmL抑制剂，根据遗传转化载体上筛选标记施加不同类型及浓度的筛选剂；每100mL芽延长培养基MeM4的制备过程为：取成品粉末0.44g，蔗糖3g，琼脂粉0.9g，植物生长调节剂的组成0.05～0.1mg·L-16-BA+0.5～1.0mg·L-1GA3，双蒸水定容100mL，调节pH值5.80～5.85，灭菌后待温度降低为55℃加入100微升200mgml抑制剂，100μl～125μl20～25mM硫代硫酸银，根据遗传转化载体上筛选标记施加不同类型及浓度的筛选剂；每100mL生根培养基MeM5的配制：MS成品粉末0.44g，蔗糖3g，琼脂粉0.9g，100μL1mgmlIBA，双蒸水定容100mL，调节pH值5.80-5.85，高温灭菌后待温度降低为55℃加入100微升200mgmL特美汀，混合均匀；所述抑制剂为特美汀。

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百度查询： 武汉市农业科学院 一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法

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