申请/专利权人：佛山市妇幼保健院

申请日：2022-01-12

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN114457005B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;G01N33/543

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2022.05.27#实质审查的生效;2022.05.10#公开

摘要：本发明公开了一种小儿尿道平滑肌细胞的分离纯化方法，本分离纯化方法先剪碎尿道组织，然后通过酶消化和过筛得到单细胞混合液，再通过免疫磁珠法分选出平滑肌细胞，其中，免疫磁珠法采用CD97抗体标记平滑肌细胞，最后通过多次差速贴壁法进一步纯化细胞，本分离纯化方法操作简便，且得到的平滑肌细胞纯度高，生物特性正常，适用于快速大量获得尿道平滑肌细胞。

主权项：1.一种小儿尿道平滑肌细胞的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S001.尿道组织预处理：将尿道组织清洗干净后剪碎，用酶进行消化，消化后过筛，离心，收集细胞沉淀；所述步骤S001中，尿道组织采用II型胶原酶进行消化；步骤S002.标记：将细胞沉淀重悬后，加入生物素标记的CD97单抗，孵育，然后加入链霉亲和素标记的免疫磁珠，孵育，孵育后离心收集沉淀；步骤S003.免疫磁珠分选：将沉淀重悬，重悬液通过固定在磁架上的分选柱进行分选，洗出杂质，再把分选柱从磁架上取下，冲洗分选柱，收集洗出的细胞；步骤S004.细胞纯化：将收集的细胞接种至培养皿培养，然后通过多次差速贴壁法纯化细胞；所述多次差速贴壁法纯化细胞包括以下步骤：步骤S004a.细胞培养至80%汇合度时，用胰酶消化，然后制成单细胞悬液，吸取单细胞悬液接种至下一个培养皿；步骤S004b.细胞贴壁0.5-1h后，吸取上清液接种至下一个培养皿；步骤S004c.细胞贴壁0.5-1h后，再次吸取上清液接种至下一个培养皿；步骤S004d.细胞培养24h，完成一次传代；反复多次进行步骤S004a至步骤S004d的操作；所述步骤S002中，免疫磁珠孵育后，还包括加入细胞分离缓冲液进行稀释，稀释后再离心收集沉淀。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 佛山市妇幼保健院 一种小儿尿道平滑肌细胞的分离纯化方法

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