申请/专利权人：江南大学

申请日：2023-06-28

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802015A

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/52;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/04;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了产麦角硫因大肠杆菌工程菌的构建与优化，属于微生物工程领域。本发明以E.coliBL21DE3为宿主，通过在工程菌途径酶EgtB的N端融合促溶标签，优化RBS强度调控翻译速率，并对11种不同真菌来源的麦角硫因合成途径酶egt1与egt2进行筛选，并利用基因组编辑系统弱化代谢通路基因，强化硫转运途径基因，可使工程菌的麦角硫因产量达到434.96mgL，分批补料发酵产量达到4063.15mgL，大大提高了麦角硫因工程菌的生产效率和生产强度。

主权项：1.一种基因工程菌，其特征在于，在出发菌株的基础上进行了如下至少一种改进：1在γ-谷氨酰乙酰半胱氨酸S-氧化物合酶编码基因EgtB的N端融合促溶标签；所述促溶标签包括但不限于MBP、SUMO、GST、TrxA和DsbC；2将γ-谷氨酰乙酰半胱氨酸S-氧化物合酶EgtB的RBS序列替换为SEQIDNO.6～16任一所示的序列；3表达真菌来源的麦角硫因合成途径基因；所述基因包括但不限于粟酒裂殖酵母Schizosaccharomycespombe来源的Spegt1、Spegt2，粗糙脉孢菌Neurosporacrassa来源的Ncegt1、Ncegt2，里氏木霉Trichodermareesei来源的Tregt1、Tregt2，麦角菌Clavicepspurpurea来源的Cpegt1、Cpegt2，蕈菌灰树花Grifolafrondosa来源的Gfegt1、Gfegt2或平菇Pleurotusostreatus来源的Poegt2；4沉默或缺失麦角硫因前体氨基酸代谢途径支路基因；所述麦角硫因前体氨基酸代谢途径支路基因包括甲硫氨酸代谢途径的转录阻遏因子metJ、半胱氨酸代谢途径中的丝氨酸脱氨酶基因sdaA和GTP3′,8-环化酶基因moaA中的一个或多个基因；5强化基因组上转运蛋白的表达；所述转运蛋白包括但不限于大肠杆菌ABC转运蛋白CysPUWA与硫酸盐转运蛋白CysZ；6过表达γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因egtA、天冬氨酸激酶基因thrA及磷酸甘油酸脱氢酶基因serAT410STOP。

全文数据：

权利要求：

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