申请/专利权人：中国石油大学(华东)

申请日：2023-12-28

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117801952A

主分类号：C12M3/00

分类号：C12M3/00;C12M1/00;C12N5/079;C12N5/09;C12N5/071

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种利用微流控芯片进行培养神经细胞和胰腺癌细胞并使其贴壁在微流控芯片内，随后通过注射泵用于进行胰腺癌细胞与神经细胞之间的持续物质循环。包括利用微流控表面处理将纤连蛋白修饰在芯片基底上，芯片液封后细胞贴壁在微流控芯片内，利用注射泵将两个微流控芯片内的神经细胞和胰腺癌细胞分泌的物质持续循环下去，通过观察神经细胞的形态来分析两种细胞的相互作用。本发明在微流控芯片上利用注射泵实现胰腺癌细胞与神经细胞之间的持续物质循环，加工制作过程简单经济，可以用于直接观察，分析两种细胞的形态变化，对研究神经细胞‑胰腺癌细胞协同影响机制具有巨大意义。

主权项：1.一种基于SERS微流控芯片的胰腺癌-神经细胞协同影响模拟方法，其特征在于，直接设计微流控芯片的微通道保证流体均匀的流入细胞培养腔室中，不仅可以让芯片表面处理的纤连蛋白均匀的修饰在芯片基底上，而且可以让细胞悬浮液中的细胞完全分布在培养腔室中；通过优化纤连蛋白的浓度，使得神经细胞和胰腺癌细胞更快的附着在微流控芯片的基底上，再经过静态细胞孵育，让神经细胞和胰腺癌细胞贴壁在芯片内；最后通过两个注射泵的程序循环推拉过程，以达到两种细胞分泌的物质持续循环在系统中，用来模拟出胰腺癌细胞天然神经浸润的侵袭过程，完成胰腺癌-神经细胞协同影响模拟；具体包括以下步骤；步骤1，神经细胞与胰腺癌细胞的培养；准备含有营养物质和缓冲系统的培养基，加入胎牛血清，再将原代培养的细胞从冻存管中取出，经过离心后去除上清液，加入培养基溶液配置成单细胞悬浮液，将细胞悬液接种到培养皿中，之后将接种有细胞的培养皿放入二氧化碳培养箱中，最当细胞密度达到一定范围时，用胰蛋白酶消化细胞，将细胞吹打成单细胞悬液并离心，于培养基中重悬备用；所述的细胞为神经细胞或胰腺癌细胞；步骤2，微流控芯片的制备；通过UV紫外光刻技术将设计的芯片掩膜制备成芯片的硅阳模板，使用聚二甲基硅氧烷PDMS进行浇铸，PDMS使用AB胶使用比例为10:1，搅拌均匀后置于真空腔室去除气泡，对制备的阳模板进行注塑倒模，在加热板上进行预加热去除微通道上的气泡，置于70℃烘箱2h；后使用刀具将PDMS芯片分割切成单块，用打孔器将进液口和出液口打通，即得到了单层的微流控芯片；芯片有一个进液口和一个出液口，在芯片中间有一个培养细胞的腔室用于培养细胞；步骤3，微流控芯片的高压灭菌和表面处理；将获得的微流控芯片放入高压灭菌锅处理，将芯片放在烘箱中过夜，去除水汽，灭菌后，先用PBS清洗三次芯片，之后将纤连蛋白通入到芯片中室温孵育2小时，过程中保证无菌条件；之后用PBS清洗微流控芯片通道后备用；步骤4，神经细胞和胰腺癌细胞在芯片上贴壁培养；所述的神经细胞和胰腺癌细胞在芯片上贴壁培养方法为：在微流控芯片内加入步骤1中所述的对应细胞的培养基溶液，用移液枪将20μL已经重悬好的106mL细胞悬浮液缓慢通入微流控芯片内进行贴壁培养，将芯片的进液口和出液口滴加用于细胞静态培养所需的培养基溶液进行液封，之后将芯片放入培养箱12h，细胞会贴壁在微流控芯片内；步骤5，利用注射泵连接芯片进行胰腺癌细胞与神经细胞之间的持续物质循环；将两种已贴壁好的细胞芯片用Tygon软管将两个注射泵和细胞芯片连接起来，让两种细胞分泌的物质通过两个注射泵循环，循环工作1-2天，通过显微镜观察细胞生长状态。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国石油大学(华东) 基于SERS微流控芯片的胰腺癌-神经细胞协同影响模拟方法

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