申请/专利权人：河南科技大学

申请日：2024-01-11

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802026A

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/77;C12N15/65;C12R1/15

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明涉及谷氨酸棒杆菌诱导型CRISPR‑Cpf1基因组整合系统、构建方法及应用，属于基因工程技术领域，本发明利用诱导型启动子PrpR‑PrpD2表达Cpf1蛋白，构建一个重组质粒含有靶向crRNA和靶基因的同源修复模板，另一个质粒诱导表达Cpf1蛋白的双质粒系统。该系统将重组和切割事件分离，解决了谷氨酸棒杆菌基因组进行大片段DNA整合难题，同时提高了基因编缉效率，为谷氨酸棒杆菌代谢工程研究和菌株构建提供技术保障。

主权项：1.谷氨酸棒杆菌诱导型CRISPR-Cpf1基因组整合系统的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）构建整合模式菌S-1：在谷氨酸棒杆菌野生菌的cgl1890位点整合一个不完整的KanR基因，构建整合模式菌WT△cgl1890::kans，即整合模式菌S-1；（2）建立PrpR-PrpD2介导的诱导型CRISPR-Cpf1双质粒基因整合系统：分别构建pEC-PrpR-PrpD2-Cpf1和pXMJ19-crRNAxyLA::kan-xyLA500质粒；将EC-PrpR-PrpD2-Cpf1质粒转化至谷氨酸棒杆菌感受态细胞、培养、制备感受态细胞；再将pXMJ19-crRNAxyLA::kan-xyLA500质粒转入所述感受态细胞，涂布CmR-SpeR培养基平板，32℃过夜培养；将平板的单菌落对点至含有CmR-SpeR-丙酸钠的培养基平板中，诱导Cpf1的表达；再利用PCR进行菌体克隆，获得目的菌株。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南科技大学 谷氨酸棒杆菌诱导型CRISPR-Cpf1基因组整合系统、构建方法及应用

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