申请/专利权人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

申请日：2024-03-01

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802275A

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/19;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。

主权项：1.犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果；所述犊牛腹泻主要病原犊牛腹泻主要病原为牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99；所述荧光定量PCR的扩增引物包括BRVPCR扩增引物对BRV-NSP5-U、BRV-NSP5-L2，BCoVPCR扩增引物对BCoVN476F、BCoVN570R和大肠杆菌K99扩增引物对K99-U1、K99-L2；所述BRV-NSP5-U如SEQIDNO.1所示，所述BRV-NSP5-L2如SEQIDNO.2所示，所述BCoVN476F如SEQIDNO.4所示，所述BCoVN570R如SEQIDNO.5所示，所述K99-U1如SEQIDNO.7所示，所述K99-L2如SEQIDNO.8所示。

全文数据：

权利要求：

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