申请/专利权人：中国科学院成都生物研究所

申请日：2022-08-17

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN115161340B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/24;A01H5/00;A01H6/00;C07K14/54

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.10.28#实质审查的生效;2022.10.11#公开

摘要：本发明提供了一种浮萍遗传转化方法，包括浮萍愈伤组织的诱导培养、浮萍愈伤组织的继代培养、利用含目的基因的农杆菌侵染愈伤组织、含目的基因的农杆菌侵染后的愈伤组织的筛选培养以及含目的基因的愈伤组织的再生步骤。该方法通过对各步骤培养基及培养条件的筛选和优化，一个月即可实现转化与未转化的愈伤组织的筛选，同时仅需一个月即可将愈伤组织再生为完整的、形态正常的植株。相对于现有技术，本发明具有筛选和再生效率更高的特点。本发明还提供了该方法在生产外源蛋白中的应用，以及利用浮萍表达细胞因子的方法，解决了现有技术以烟草作为底盘植物来表达细胞因子存在的安全性问题和临床使用受限的问题。

主权项：1.一种浮萍遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：1浮萍愈伤组织的诱导培养将浮萍叶状体接种于愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养，得到愈伤组织，诱导培养条件：光周期为16～14h:8～10h，光照强度为80～180μmolm2s，愈伤组织诱导培养基为添加5μM2,4-二氯苯氧乙酸、0.5μM噻苯隆、30gL蔗糖、3.5gL结冷胶的MS基础培养基，愈伤组织诱导培养基的pH值为5.6；所述浮萍叶状体来源于绿萍M0157；2浮萍愈伤组织的继代培养将愈伤组织转接至继代培养基中进行继代培养，继代培养条件：光周期为16～14h:8～10h，光照强度为80～180μmolm2s，继代培养基为添加1～1.5μM2,4-二氯苯氧乙酸、0.2～0.25μM6-苄氨基腺嘌呤、25～30gL蔗糖、0.3～0.4gL结冷胶的MS基础培养基，继代培养基的pH值为5.5～5.7；3利用含目的基因的农杆菌侵染愈伤组织构建含目的基因的植物表达载体，将构建的含目的基因的植物表达载体转入农杆菌，用转入了目的基因的农杆菌侵染愈伤组织，将侵染后的愈伤组织接种至共培养培养基中，在黑暗条件下培养3～4天，共培养培养基为添加1～1.5μM2,4-二氯苯氧乙酸、0.2～0.25μM6-苄氨基腺嘌呤、80～120μM乙酰丁香酮、25～30gL蔗糖、0.3～0.4gL结冷胶的MS基础培养基，共培养培养基的pH值为5.5～5.7；4含目的基因的农杆菌侵染后的愈伤组织的筛选培养将共培养后的愈伤组织转接至筛选培养基上进行筛选培养，筛选出含目的基因的愈伤组织，筛选培养条件：光周期为16～14h:8～10h，光照强度为20～60μmolm2s，筛选培养基为添加1～1.5μM2,4-二氯苯氧乙酸、0.2～0.25μM6-苄氨基腺嘌呤、100mgL筛选剂G418、200～250mgL头孢、25～30gL蔗糖、0.3～0.4gL结冷胶的MS基础培养基，筛选培养基的pH值为5.5～5.7；5含目的基因的愈伤组织的再生将筛选得到的含目的基因的愈伤组织转接至再生培养基中进行再生培养，得到含目的基因的转基因浮萍；再生培养的条件：光周期为24h全光照，光照强度为80～180μmolm2s，再生培养时间为28～32天，再生培养基为添加4～6gL蔗糖、100mgL筛选剂G418、200～250mgL头孢、0.3～0.4gL结冷胶的12SH培养基，再生培养基的pH值为5.5～5.7。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院成都生物研究所 浮萍遗传转化方法及应用与利用浮萍表达细胞因子的方法

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