申请/专利权人：华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司

申请日：2020-02-17

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN112391410B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/90;C12N15/12;C12N15/113;C12N5/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2021.03.12#实质审查的生效;2021.02.23#公开

摘要：本申请公开了一种sgRNA及其在修复内含子异常剪接中的应用。所述sgRNA用于修复由HBBβ‑珠蛋白基因IVS2‑654CT突变导致的内含子异常剪接，包括sgRNA‑U和sgRNA‑D，所述sgRNA‑U的靶向位点在IVS2‑654CT位点的上游21bp至IVS2‑654CT位点所在的HBB基因第二内含子起始位点范围内，所述sgRNA‑D的靶向位点在IVS2‑654CT位点的下游71bp至IVS2‑654CT位点所在的HBB基因第二内含子终止位点范围内。本发明可利用现有基因编辑技术修复依赖输血型β‑地贫IVS2‑654CT，编辑效率高，能高效修饰自体造血干细胞持久平衡造血系统。

主权项：1.一种修复细胞中由于β-珠蛋白基因IVS2-654CT突变导致内含子异常剪接的CRISPR-Cas9系统在制备细胞治疗制剂中的应用，所述IVS2-654CT的突变引入额外的剪接供体位点导致内含子异常剪接，其特征在于，所述应用包括利用CRISPR-Cas9系统对β-珠蛋白基因进行基因编辑以删除所述额外的剪接供体位点的步骤，所述额外的剪接供体位点的序列为AAGGTAATA；所述CRISPR-Cas9系统包括Cas9和靶向目标序列的sgRNA组；所述sgRNA组由sgRNA-U和sgRNA-D组成，所述sgRNA-U的靶向位点在IVS2-654CT位点的上游21bp至IVS2-654CT位点所在的HBB基因第二内含子起始位点范围内，所述sgRNA-U的靶向序列为SEQIDNo.1所示序列；所述sgRNA-D的靶向位点在IVS2-654CT位点的下游71bp至IVS2-654CT位点所在的HBB基因第二内含子终止位点范围内；所述sgRNA-D的靶向序列为SEQIDNo.36所示序列；所述的细胞治疗为针对地中海贫血的细胞治疗，所述细胞为造血干细胞。

全文数据：

权利要求：

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