申请/专利权人：中国科学院水生生物研究所

申请日：2023-12-29

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117848809A

主分类号：G01N1/30

分类号：G01N1/30

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种简单、快速、通用的纤毛虫染色方法，用于纤毛虫纤毛图式、细胞核等关键形态特征的表征；本发明包括以下步骤：配置所需溶液、纤毛虫细胞收集并清洗、纤毛虫细胞固定、黏附，并用PBS缓冲液清洗三次、添加Tubulin染料孵育，并用PBS缓冲液清洗三次、添加DAPI染料孵育，并用PBS缓冲液清洗一次、加抗淬灭剂盖片并封片、高分辨率荧光显微镜观察并拍照。本发明适用于各种类纤毛虫纤毛毛基体和细胞核染色，具有实验步骤简单、快速染色效果好，不同纤毛虫种类通用性好、可高通量地同时进行多种纤毛虫种类染色的特点。本发明可应用于纤毛虫形态分类、细胞生物学和生态学等研究。

主权项：1.一种简单、快速、通用的纤毛虫染色方法，其特征在于：适用于多种不同种类的纤毛虫及其群体同时进行固定和染色，包括如下步骤：1配制缓冲液、固定液和染色液；2细胞收集：吸取适量纤毛虫细胞，将纤毛虫细胞清洗干净，加入无菌水悬浮细胞；3细胞固定：使用固定液将步骤2得到的悬浮细胞进行低温固定；4黏附细胞：在载玻片上滴加多聚-L-赖氨酸溶液，涂匀后烘干，冷却至室温；吸取步骤3固定后得到的细胞悬浊液均匀放置在载玻片上，吸去多余的液体，室温自然风干；5清洗：在步骤4处理后的载玻片上加入PBS缓冲液重悬纤毛虫细胞清洗10min，重复多次；6Tubulin染料孵育：向清洗之后的细胞加入刚配置的Tubulin染料溶液，覆盖细胞后，将含有细胞的载玻片移入湿盒中，避光孵育；7再次清洗：利用玻璃口吸管除去染料，保留虫体，再次加入PBS缓冲液重悬纤毛虫细胞清洗10min，重复多次；8DAPI染料孵育：加入DAPI染料溶液孵育步骤7得到的细胞，将含有细胞的载玻片移入湿盒中，避光孵育；9第三次清洗：利用玻璃口吸管除去步骤8中孵育后的细胞上的染料，保留虫体，加入PBS缓冲液清洗10min；10封片：向步骤9清洗后的含有细胞的载玻片滴加抗淬灭剂，利用盖破片盖片，沿盖玻片四周加入封片胶；11观察并拍照：利用高分辨率荧光显微镜观察并拍照，利用荧光特性进行观察、成像，通过不同颜色的荧光显示纤毛毛基体和细胞核，识别其在细胞中空间位置和分布。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院水生生物研究所 一种简单、快速、通用的纤毛虫染色方法

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