申请/专利权人：江苏大学

申请日：2021-07-12

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN113584086B

主分类号：C12N15/867

分类号：C12N15/867;C12N15/12;C12N5/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2021.11.19#实质审查的生效;2021.11.02#公开

摘要：本发明提供一种小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞的方法，包括如下步骤：制备高质量的浓缩慢病毒用于转染备选转录因子；将小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞；优化筛选可用于黑素细胞直接重编程的转录因子；鉴定诱导黑素细胞的功能。本发明是一种优化的高效的黑素细胞直接重编程方法，简化并优化的黑素细胞直接重编程体系，主要包括两方面：制作高质量浓缩病毒和优化重编程培养基成分，提高直接重编程所得到的黑素细胞的功能；筛选作用最显著的转录因子用于黑素细胞直接重编程；对直接重编程的黑素细胞进行功能鉴定，为色素脱失性疾病比如白癜风的病人提供新的治疗策略。

主权项：1.一种小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、制备高质量的浓缩慢病毒，用于转染备选转录因子；步骤S2、优化筛选可用于黑素细胞直接重编程的转录因子，将优化后的转录因子组合Mitf和Sox10用于将小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞；步骤S3、鉴定步骤S2得到的重编程黑素细胞的功能；所述步骤S2包括以下步骤：将小鼠的胚胎成纤维细胞接种在用明胶包被好的孔中，小鼠胚胎成纤维细胞MEF达到40％-50％的密度，用DMEM+10%FBS培养基换液；取出浓缩慢病毒，按量添加至每个孔中，添加Polybrene；感染病毒8-12小时后用新配的DMEM+10%FBS培养基换液，同时添加嘌呤霉素；感染病毒48小时后逐步更换重编程培养基，同时添加CHIR99021；将细胞培养在培养皿中传代扩增并且冻存细胞得到重编程后的黑素细胞；所述重编程培养基成分包括：90%RPMI-1640培养基、10%胎牛血清、100ngmL人重组干细胞因子、0.1μM人内皮素3、20pM霍乱毒素、200nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-醋酸酯、10ngmL人重组碱性成纤维细胞生长因子、0.5μgmL氢化可的松、5μgmL人重组胰岛素、24μgmL腺嘌呤。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞的方法

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