申请/专利权人：山东大学

申请日：2023-12-04

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117363568B

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775;A61K35/28;A61P17/02;A61P31/04;A61P3/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2024.01.26#实质审查的生效;2024.01.09#公开

摘要：本发明涉及一种脂肪间充质干细胞外泌体及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。包括步骤如下：（1）提取分离原代脂肪间充质干细胞；（2）传代培养脂肪间充质干细胞；（3）特征参数蓝光刺激细胞；（4）提取分离外泌体。本发明首次通过特征参数蓝光的照射刺激刺激获得脂肪间充质干细胞外泌体，该方法可将脂肪间充质干细胞释放外泌体效率提高1.6倍，达到了增加脂肪间充质干细胞外泌体产量的目的。并且本发明提供的脂肪间充质干细胞外泌体制备方法不需要在干细胞中转入外源基因，不涉及病毒转染载体，不添加任何其它物质，不使用抗生素，具有广阔的临床应用前景。

主权项：1.一种脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：（1）提取分离原代脂肪间充质干细胞：取小鼠腹股沟皮下脂肪，经清洗、剪切后，置于37℃恒温气浴旋转振荡箱中，以160~200rpm恒温振荡消化25~35min，过滤后离心弃上清，将沉淀重悬、离心、洗涤后再次重悬，接入至增殖培养基中，在37℃、5%CO2条件下培养6~8天，得到原代脂肪间充质干细胞；（2）传代培养脂肪间充质干细胞：取步骤（1）分离的原代脂肪间充质干细胞，经清洗和消化后，加入等体积的增殖培养基混匀，离心后弃上清，将沉淀重悬混匀，接入至增殖培养基中，在37℃、5%CO2条件下培养1~2天，得到传代脂肪间充质干细胞；（3）特征参数蓝光刺激细胞：取步骤（2）获得的传代脂肪间充质干细胞，在光波长为455nm、光强度为4.28mWcm2的条件下，按照1次天用蓝光光源连续照射刺激传代脂肪间充质干细胞3天，每次60min，得到刺激后细胞；所述蓝光光源和传代脂肪间充质干细胞的距离为220mm，并在照射刺激的第2天将增殖培养基更换为无血清饥饿培养基；（4）提取分离外泌体：收集步骤（3）获得的照射刺激后细胞的培养基上清液，过滤后通过超速离心法将外泌体分离，得到脂肪间充质干细胞外泌体；所述超速离心法具体为：300×g离心10min，弃沉淀，上清转移至新的洁净离心管中；2000×g离心15min，弃沉淀，上清转移至新的洁净离心管中；10000×g离心30min，弃沉淀，使用0.22μm滤膜过滤上清后，转移至新的洁净离心管中；100000×g离心90min，弃上清，将沉淀使用PBS缓冲液重悬；100000×g离心90min，弃上清，将沉淀使用PBS缓冲液重悬。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东大学 一种脂肪间充质干细胞外泌体及其制备方法与应用

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