申请/专利权人：东北农业大学

申请日：2023-12-19

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117417874B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12Q1/6897;C12P19/12;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2024.02.06#实质审查的生效;2024.01.19#公开

摘要：本发明涉及微生物工程技术领域。本发明提供了一种工程菌株HC6‑MT及其在低温生产海藻糖中的应用，所述工程菌株HC6‑MT通过将启动子增强过表达载体PBBR1‑PD‑AB导入海藻糖降解基因缺失菌株HC6‑M中构建得到。本发明还提供了一种拉乌尔菌HC6中低温强启动子PcspD的筛选方法，所述筛选得到的低温强启动子PcspD用于构建启动子增强过表达载体PBBR1‑PD‑AB。通过本发明技术方案构建得到的工程菌株HC6‑MT可以在低温条件下降解玉米秸秆半纤维素生产海藻糖，并且还能够显著提高海藻糖产量，这也为海藻糖低热能、低成本、低污染生产提供了有效方案，为农业废弃物低碳经济发展提供了新思路。

主权项：1.一种工程菌株HC6-MT，其特征在于，将启动子增强过表达载体PBBR1-PD-AB导入海藻糖降解基因缺失菌株HC6-M中，构建得到所述工程菌株HC6-MT；所述启动子增强过表达载体PBBR1-PD-AB中包括从拉乌尔菌HC6中分离的低温强启动子PcspD、半纤维素关键降解基因xynB和海藻糖合成基因otsA；所述低温强启动子PcspD的序列如SEQIDNO.28所示；所述低温的温度为20℃；所述海藻糖降解基因缺失菌株HC6-M通过以下方法获得：以拉乌尔菌HC6为初始菌株，敲除拉乌尔菌HC6基因组中海藻糖降解基因glvA、treC和TREH；所述海藻糖降解基因glvA的上、下游同源臂PCR引物序列为glvA引物1组和glvA引物2组，所述glvA引物1组的具体序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述glvA引物2组的具体序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；所述海藻糖降解基因treC的上、下游同源臂PCR引物序列为treC引物1组和treC引物2组，所述treC引物1组的具体序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示；所述treC引物2组的具体序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示；所述海藻糖降解基因TREH的上、下游同源臂PCR引物序列为TREH引物1组和TREH引物2组，所述TREH引物1组的具体序列如SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示；所述TREH引物2组的具体序列如SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北农业大学 一种工程菌株HC6-MT及其在低温生产海藻糖中的应用

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