申请/专利权人：浙江大学

申请日：2023-12-15

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866876A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12Q1/6869

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种用于单细胞测序的蜜蜂咽下腺单细胞悬液的制备方法，包括咽下腺组织清洗、酶消化处理、杂质过滤、细胞清洗、细胞观察和质检。本发明的蜜蜂咽下腺单细胞悬液的制备方法，第一次将蜜蜂咽下腺单细胞进行分离，可以获得高活性、高细胞数的咽下腺单细胞悬液，符合单细胞测序上机要求，填补了制备蜜蜂咽下腺单细胞悬液方面的空缺。

主权项：1.一种用于单细胞测序的蜜蜂咽下腺单细胞悬液的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1咽下腺组织清洗：将解剖取出的蜜蜂咽下腺样本浸没于保存液中，静置后将上清液全部弃去，加入10％FBS后混匀，静置后弃去上清，重复清洗2次；2酶消化处理：向步骤1清洗后的组织中加入足量酶解离溶液进行消化，酶解结束后在管中加入10％FBS终止消化，得到腺体细胞混合液；3杂质过滤：将步骤2中腺体细胞混合液静置，吸取上清通过细胞筛进行过滤，用10％FBS清洗细胞筛，得到细胞悬液；4细胞清洗：将步骤3中收集得到的细胞悬液离心，弃去上清，用10％FBS重悬再次离心；再次用10％FBS重悬，得到最终的单细胞悬液；5细胞观察与质检：吹匀步骤4中得到的单细胞悬液，取部分细胞悬液置于细胞计数板中，加入AOPI染色，观察细胞，并计算细胞活性、细胞浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 一种用于单细胞测序的蜜蜂咽下腺单细胞悬液的制备方法

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