申请/专利权人：南京大学

申请日：2022-07-25

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117871858A

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N33/543;G01N21/78

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：在本发明中，我们制备了多肽功能化修饰的COFs，并且用其负载酶分子并研发了一种蛋白质的比色分析方法。首先，我们合成了一种具有炔基的COFs纳米颗粒，通过一系列表征实验验证了其成功制备。然后，我们利用偶联剂与活化剂将多肽修饰在COFs表面上，成功制备了多肽功能化COFs探针。随后，我们在COFs表面修饰了辣根过氧化物酶HorseradishPeroxidase，HRP，HRP的催化活性赋予了COFs探针信号输出和放大的能力，而多肽能够特异性识别并结合靶标蛋白，因此我们所构建的COFs探针能够用于对靶标蛋白的灵敏分析，以富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白Secretedproteinacidicandrichincysteine，SPARC的定量分析为例，研究表明，我们所提出的方法取得了较好的检测效果，检测限为0.23ngmL，并且能够应用于复杂样本中SPARC蛋白的检测。

主权项：1.一种基于多肽功能化共价有机框架的蛋白质比色分析应用，其特征在于包括如下步骤：1将多价捕获抗体固定在微滴度板上用于特异性捕获靶标蛋白。将100μL12000浓度的SPARC抗体在4℃条件下过夜孵育在透明96孔板中。随后用1xPBST清洗3次，去除未结合的抗体。其次，加入100μL封闭试剂1％BSA，在37℃孵育30分钟封闭微孔板上未结合的位点。接着，用1xPBST清洗3次，去除未结合的BSA；2在微孔板每孔中加入一定浓度的不同分析物，即对应的靶标蛋白或检测样本，室温孵育2小时，随后用1xPBST清洗3次，去除未结合的靶标蛋白和杂质；3加入合成的一定浓度和体积的多肽功能化共价有机框架PHCs，室温孵育2小时。用1xPBST清洗3次，去除未结合的PHCs复合物；4加入100μLTMB显色液，并在30分钟后，加入100μL10％硫酸溶液终止反应。使用InfiniteM200Pro多功能酶标仪记录溶液在450nm波长下的吸光度。所有测量均在室温25±1.0℃下进行。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京大学 一种基于多肽功能化共价有机框架的蛋白质比色分析方法

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