申请/专利权人：甘肃中医药大学

申请日：2024-01-24

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866771A

主分类号：C12N1/02

分类号：C12N1/02;C12N1/20;C12N11/14;C12N11/10;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/30;C02F101/38;C02F101/34

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种辛硫磷降解菌株和辛硫磷降解菌球的制备方法及应用，菌株制备方法包括大黄根际土壤选取、细菌的分离纯化、辛硫磷降解菌的初筛和辛硫磷降解菌的复筛，菌株制备降解菌球的方法包括菌种培养和凹凸棒固定化菌球制备；本发明中的RL4通过海藻酸钠+凹凸棒固定后，72H辛硫磷降解率为87.70%，较使用游离细菌提高了1.43%，RL4通过海藻酸钠+凹凸棒固定后，在辛硫磷污染污水中，72H辛硫磷去除率为77％，较使用游离细菌提高了12.4%，RL4通过海藻酸钠+凹凸棒固定后，在重复使用5次后仍能保持80%的辛硫磷降解活性，表明凹凸棒固定化辛硫磷降解菌球SA+ATP‑RL4用于辛硫磷原位修复是可行的。

主权项：1.一种辛硫磷降解菌株的制备方法，其特征在于包括如下步骤：S1、大黄根际土壤选取：选择被辛硫磷污染的掌叶大黄RheumpalmatumL.根际土壤作为土样，过筛；S2、细菌的分离纯化：称取S1中选取的土样，加入无菌水振荡，将得到的土壤悬液稀释后接种于LB琼脂培养基上，在28℃下倒置培养5d，对长出的菌落进行划线分离纯化，获得纯培养菌种，置于4℃冰箱冷藏保存；S3、辛硫磷降解菌的初筛：将S2得到的菌种接种于LB液体培养基上，在28℃下，振荡培养得到菌液，当OD600达到0.6时，取菌液在4℃条件下离心收集菌体，菌体用无菌水洗涤并重悬得到菌悬液，在固体选择培养基的表面放置无菌牛津杯，杯中注入100µＬ菌悬液，于28℃下恒温避光培养24h，待牛津杯内液体自然蒸发完毕，取出牛津杯，于28℃恒温避光培养2-4d，测量降解圈直径，选择降解圈直径最大和次大的菌株进入复筛；S4、辛硫磷降解菌的复筛：活化S3得到的菌株，采用同S3的方法制备菌悬液，将菌悬液按照3%的体积比接种至MSM液体培养基中，在27℃下恒温避光振荡培养72h，得到辛硫磷降解菌株，辛硫磷降解菌株为新鞘氨醇单胞菌Novosphingobiumsp.，命名为RL4，已于2023年12月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.29226，序列如SEQIDNo.1所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 甘肃中医药大学 一种辛硫磷降解菌株和辛硫磷降解菌球的制备方法及应用

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