申请/专利权人：湖南杂交水稻研究中心

申请日：2022-06-08

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN115094085B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/65;C12N15/53;C12N15/55;C12N15/56;A01H5/10;A01H5/02;A01H6/46

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.10.14#实质审查的生效;2022.09.23#公开

摘要：本发明公开了一种水稻工程繁殖系的快速创制方法，包括：将种子诱导愈伤组织，将负载野生型育性调控基因靶位点序列的基因编辑载体和负载有育性调控基因突变序列的互补载体共转化愈伤组织，并培养至收获T1代种子，育性调控基因突变序列为利用三联体密码子兼并性对野生型育性调控基因进行定点同义突变的碱基序列、且其不被上述基因编辑载体定点编辑；将T1代种子种下，将野生型育性调控基因定点编辑成功且互补载体转化成功的植株作为水稻工程繁殖系。本发明一是工程繁殖系创制流程简化，选育时间大大缩短，二是改变了以不育系幼穗诱导愈伤组织的方法，回归到以种子来诱导愈伤组织，突破了幼穗取材的时间限制，提高了实验的效率。

主权项：1.水稻工程繁殖系的快速创制方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将常规可育水稻种子或两系不育系种子诱导愈伤组织；步骤二、通过农杆菌介导的方法，将负载野生型育性调控基因靶位点序列的基因编辑载体和负载有育性调控基因突变序列的互补载体共转化所述愈伤组织，并将共转化成功的愈伤组织继续培养至收获T1代种子，所述野生型育性调控基因为细胞色素P450羟化酶基因CYP703A3，其为如SEQIDNO:1所示的碱基序列，所述育性调控基因突变序列的表达盒为如SEQIDNO:2所示的碱基序列，其中，所述育性调控基因突变序列为利用三联体密码子兼并性对野生型育性调控基因进行定点同义突变的碱基序列、且其不被所述野生型育性调控基因靶位点序列的基因编辑载体定点编辑；步骤三、将T1代种子种下并对T1代植株鉴定，将野生型育性调控基因定点编辑成功且互补载体转化成功的植株作为水稻工程繁殖系；当采用常规可育水稻种子诱导愈伤组织时，所述互补载体上还负载有花粉致死基因和外源报告基因，当采用两系不育系种子诱导愈伤组织时，所述互补载体上还负载有花粉致死基因、外源报告基因和温敏不育基因，所述花粉致死基因为ZmAA1基因，所述外源报告基因为红色荧光蛋白标记基因，所述红色荧光蛋白标记基因的表达盒为如SEQIDNO:17所示的碱基序列，所述花粉致死基因的表达盒为如SEQIDNO:19所示的碱基序列，所述温敏不育基因为TMS5基因，所述温敏不育基因的表达盒为如SEQIDNO:18所示的碱基序列。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 湖南杂交水稻研究中心 水稻工程繁殖系的快速创制方法及其应用

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