申请/专利权人：浙江大学

申请日：2024-02-21

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117887872A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/113;C12N15/10;C12R1/085

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.16#公开

摘要：本发明涉及食品致病菌检测技术领域，旨在提供一种基于CRISPR‑Cas12a‑RAA技术检测奶粉中呕吐型蜡样芽孢杆菌的方法。包括：在蜡样芽孢杆菌基因中寻获特异性片段为靶标序列，并以此为基础完成相应引物、模板的设计工作；建立CRISPR‑Cas12a‑RAA反应体系，利用RAA引物针对待测样品DNA模板进行RAA恒温扩增，通过crRNA与Cas12a形成的二元复合体特异识别扩增产物中的靶标双链DNA，进而激活Cas12a非特异切割反应体系中的荧光探针；针对反应产物进行荧光检测；如荧光强度信号为阳性，表明奶粉中存在呕吐型蜡样芽孢杆菌；反之，则表明未检测到呕吐型蜡样芽孢杆菌。本发明具有特异性强、灵敏度高、结果准确、检测时间短和实用性强的技术优势。

主权项：1.一种基于CRISPR-Cas12a-RAA技术检测奶粉中呕吐型蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：1提取奶粉样品的基因组DNA，得到待测样品DNA模板；2建立CRISPR-Cas12a-RAA反应体系；在该体系中，利用RAA引物针对待测样品DNA模板进行RAA恒温扩增，通过crRNA与Cas12a形成的二元复合体特异识别扩增产物中的靶标双链DNA，进而激活Cas12a非特异切割反应体系中的荧光探针；所述RAA引物包括F引物和R引物，其序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述crRNA的序列如SEQIDNO.3所示；3针对CRISPR-Cas12a-RAA的反应产物进行荧光检测；如荧光强度信号为阳性，表明奶粉中存在呕吐型蜡样芽孢杆菌；反之，则表明未检测到呕吐型蜡样芽孢杆菌。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 基于CRISPR-Cas12a-RAA技术检测奶粉中呕吐型蜡样芽孢杆菌的方法

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