申请/专利权人：贝克顿迪金森公司

申请日：2022-08-30

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117897498A

主分类号：C12Q1/6804

分类号：C12Q1/6804;G01N33/53

优先权：["20210831 US 63/239,369"]

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.03#实质审查的生效;2024.04.16#公开

摘要：来自固定的细胞的RNA保存及回收。本文的公开内容包括用于从固定和或透化的细胞中保存和或回收RNA的系统、方法、组合物和试剂盒，例如用于单细胞分析。在一些实施方案中，固定和或透化的细胞用于测量细胞内靶例如蛋白表达。本文的公开内容包括使用能够使条形码序列例如分子标记序列与细胞组分结合试剂例如蛋白结合试剂的寡核苷酸关联的寡核苷酸探针定量分析样品中多于一种细胞组分靶例如蛋白靶的方法。

主权项：1.一种用于检测细胞中蛋白靶表达和核酸靶的拷贝数的方法，所述方法包括：使各自包含多于一种蛋白靶和核酸靶的拷贝的多于一个细胞固定；使所述多于一个细胞透化；使多于一种蛋白靶结合试剂与所述多于一个细胞接触，其中所述多于一种蛋白靶结合试剂中的每一种包含蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸，所述蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸包含用于所述蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸的独特蛋白靶标识符，并且其中所述蛋白靶结合试剂能够与所述多于一种蛋白靶中的至少一种特异性结合；将与所述蛋白靶结合试剂关联的多于一个细胞分区到多于一个分区，其中所述多于一个分区中的分区包含来自与所述蛋白靶结合试剂和所述细胞表面靶结合试剂关联的多于一个细胞的单细胞；在包含所述单细胞的分区中，使所述单细胞与裂解缓冲液在15℃-65℃接触以裂解所述单细胞，其中所述裂解缓冲液包含能够使蛋白-核酸复合物解离的剂；在包含所述单细胞的分区中，使多于一种寡核苷酸条形码与所述核酸靶的拷贝和所述蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸接触以进行杂交，其中所述寡核苷酸条形码各自包含第一分子标记；使与所述蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸杂交的所述多于一种寡核苷酸条形码延伸以产生多于一种条形码化蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸，所述多于一种条形码化蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸各自包含与所述独特蛋白靶标识符序列的至少一部分互补的序列和所述第一分子标记；使与所述核酸靶的拷贝杂交的所述多于一种寡核苷酸条形码延伸以产生多于一种条形码化核酸分子，所述多于一种条形码化核酸分子各自包含与所述核酸靶的至少一部分互补的序列和所述第一分子标记；获得所述多于一种条形码化核酸分子或其产物的序列信息，以确定所述多于一个细胞中的一个或更多个中所述核酸靶的拷贝数；以及获得所述多于一种条形码化蛋白靶结合试剂特异性寡核苷酸或其产物的序列信息，以确定所述多于一个细胞中的一个或更多个中所述多于一种蛋白靶中的至少一种蛋白靶的存在。

全文数据：

权利要求：

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