申请/专利权人：东曜药业有限公司

申请日：2021-11-09

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN113862399B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.01.21#实质审查的生效;2021.12.31#公开

摘要：本发明涉及基于ddPCR的痘苗病毒lister株定量测定方法，属于PCR检测技术领域。本发明提供了一种定量测定样本中痘苗病毒lister株的方法，所述方法为先提取样本中的病毒DNA，再以特异性片段作为探针，以提取得到的病毒DNA作为模板，使用ddPCR对样本中的痘苗病毒lister株进行定量分析；所述方法基于ddPCR，ddPCR可对核酸分子进行绝对定量且灵敏度高，同时，ddPCR无需标准品，变量少，准确度更高，检测下限更低，更适合拷贝数低的痘苗病毒lister株定量测定，因此，使用所述方法定量测定样本中痘苗病毒lister株具有灵敏度高、准确性高且检测下限低的优势。

主权项：1.一种定量测定样本中痘苗病毒lister株的方法，所述方法非疾病的诊断和治疗目的，所述样本为改造痘苗病毒，所述改造痘苗病毒是通过在痘苗病毒lister株的原始TK片段中，删除特异性片段并插入目的片段获得的，其特征在于，所述方法包括如下步骤：提取步骤：使用病毒DNA提取试剂盒提取改造痘苗病毒中的病毒DNA，每次使用100μL病毒进行提取，50μLelutionbuffer洗脱；检测步骤：以特异性片段作为探针，以提取得到的病毒DNA作为模板，使用ddPCR对样本中的痘苗病毒lister株进行定量分析，得到样本中痘苗病毒lister株的绝对浓度；所述ddPCR采用的上游引物和下游引物能够特异性扩增原始TK片段以及删除特异性片段并插入目的片段后的TK片段；所述痘苗病毒lister株全基因组序列的Genbank号为：KX061501.1，所述原始TK片段的核苷酸序列为SEQIDNO:4，所述特异性片段的核苷酸序列为SEQIDNO:1，所述目的片段为依次串联的GM-CSF序列和HSP-70序列，其中，GM-CSF序列的Genebank号为：MA883124.1，HSP-70序列的Genebank号为：AX811495.1；所述上游引物的核苷酸序列为SEQIDNO:2，所述下游引物的核苷酸序列为SEQIDNO:3；所述ddPCR的反应体系包含ddPCRSupermixforprobes11μL、浓度100nM的上游引物0.198μL、浓度100nM的下游引物0.198μL、浓度5μM的探针0.55μL、浓度100μM的Template9.9μL以及H2O0.154μL；所述ddPCR的反应程序如表1所示；表1ddPCR的反应程序 。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东曜药业有限公司 基于ddPCR的痘苗病毒lister株定量测定方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD