申请/专利权人：东曜药业有限公司

申请日：2022-09-05

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN115261341B

主分类号：C12N7/02

分类号：C12N7/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.11.18#实质审查的生效;2022.11.01#公开

摘要：本发明提供了一种澄清溶瘤痘苗病毒收获液的方法，该方法包括：采用核酸酶和胰酶在Tris‑HCl缓冲液体系中对溶瘤痘苗病毒细胞进行裂解和酶解处理，释放病毒，得到裂解和酶解处理后的样品；裂解和酶解处理后的样品经过微滤，得到澄清后的溶瘤痘苗病毒收获液。本发明操作简单，条件温和，不仅能澄清痘苗病毒收获液，显著提高病毒过滤回收率，还能提高核酸酶的酶切效果，大幅降低宿主DNA残留。

主权项：1.一种澄清溶瘤痘苗病毒收获液的方法，该方法包括：采用离心或深层过滤方法，从培养溶瘤痘苗病毒细胞的培养液中去除培养基，收集得到溶瘤痘苗病毒细胞；采用核酸酶和胰酶在Tris-HCl缓冲液体系中对溶瘤痘苗病毒细胞进行裂解和酶解处理，释放病毒，得到裂解和酶解处理后的样品；裂解和酶解处理后的样品经过微滤，得到澄清后的溶瘤痘苗病毒收获液；进行裂解和酶解处理的过程为以下方式：（1）用含有核酸酶的Tris-HCl缓冲液重悬溶瘤痘苗病毒细胞，进行裂解处理，释放病毒，得到裂解样品；（2）向所述裂解样品中加入胰酶，继续酶解处理，得到裂解和酶解处理后的样品；所述溶瘤痘苗病毒细胞为感染溶瘤痘苗病毒的宿主细胞；所述宿主细胞为HeLaS3；所述痘苗病毒为痘苗病毒Lister；所述缓冲液的pH为9.0-10.0；进行酶解处理的条件为：胰酶浓度为0.25%Trypsin-EDTA；胰酶加入体积为样品体积的120-1320；常温处理1-3h。

全文数据：

权利要求：

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