申请/专利权人：中国热带农业科学院三亚研究院

申请日：2024-01-05

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117535436B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/64

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2024.03.01#实质审查的生效;2024.02.09#公开

摘要：本发明提供一种基于CRISPRCas12a‑RPA快速检测水稻细菌性条斑病菌的序列组合及应用，属于病原微生物检测技术领域，提供了一种检测水稻细菌性条斑病菌的RPA引物对和特异性crRNA序列的序列组合，还提供了一种基于CRISPRCas12a‑RPA快速检测水稻细菌性条斑病菌的检测试剂盒、检测方法和应用。本发明的检测方法将RPA扩增方法与CRISPRCas12a的检测方法结合来检测水稻细菌性条斑病菌，通过蓝光切胶仪和侧流层析试纸条实现了可视化检测；本发明的检测方法具有良好的特异性和敏感性，只需要简单的仪器便可以进行检测，具有在现场和田间快速对水稻细菌性条斑病菌核酸进行检测的优势。

主权项：1.一种基于CRISPRCas12a-RPA快速检测水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonas.oryzaepv.oryzicola）的序列组合，其特征在于，包括根据avrRxo1基因设计的RPA引物对序列、crRNA序列和ssDNA探针序列；其中，RPA引物对序列为：正向引物RPA-avrRxo1-F2的序列如SEQIDNO：1所示；反向引物RPA-avrRxo1-R2的序列如SEQIDNO：2所示；crRNA序列如SEQIDNO：3所示；所述ssDNA探针序列是用于荧光定量PCR检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列、用于可视化荧光检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列或用于侧流层析试纸条检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列；所述用于荧光定量PCR检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM或ssDNA-reporter-CY5；其中，ssDNA-reporter-FAM为：5’-FAM-TTATT-BHQ1-3’；ssDNA-reporter-CY5为：5’-CY5-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；所述用于可视化荧光检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM-2，其序列为：5’-FAM-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；所述用于侧流层析试纸条检测的水稻细菌性条斑病菌的ssDNA探针序列为FB-reporter，其序列为：5’-FAM-TTTTTTTTT-Biotin-3’。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国热带农业科学院三亚研究院 基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测水稻细菌性条斑病菌的序列组合及应用

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