申请/专利权人：上海松皓生物科技有限公司

申请日：2024-01-17

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117907253A

主分类号：G01N21/31

分类号：G01N21/31;C12Q1/02;G01N15/10;G01N21/84

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本发明提供一种白茶提取物抗氧化及抗黑色素生成的研究方法，涉及植物提取物作用机理研究领域。该白茶提取物抗氧化活性研究方法，包括步骤S1.材料准备；步骤S2.DPPH自由基清除率的测定；步骤S3.羟基自由基清除率的测定；步骤S4.HFF‑1人皮肤成纤维细胞培养；步骤S5.白茶提取物对氧化损伤细胞的修复作用；步骤S6.进行数据统计。本发明中，通过对两种不同品种来源的白茶提取物的抗氧化及抗黑色素生成活性进行系统研究，在生化和细胞水平上抗氧化能力评估体系评价两种不同品种的白茶提取物抗氧化活性，为白茶提取物的开发和在功能性化妆品的应用上提供科学依据。

主权项：1.一种白茶提取物抗氧化活性研究方法，其特征在于，包括以下过程：步骤S1.材料准备选择白茶提取物1号与白茶提取物2号作为实验对象，并且准备茶多酚、DPPH自由基清除能力试剂盒与羟自由基测试试剂盒、DMEM培养基、胰蛋白酶、青霉素与链霉素、胎牛血清、其他化学纯有机和无机试剂、HFF-1人皮肤成纤维细胞等原料；步骤S2.DPPH自由基清除率的测定以ddH2O为溶剂，配制系列梯度质量浓度的待测样品溶液，并根据DPPH自由基清除能力试剂盒说明书，按下表1所示配比在ep管中进行加样：表1DPPH自由基清除率测定加样表 加样后混合均匀，在室温下避光静置30min，然后以4000rmin离心5min后，96孔板每孔加样60μL，每一浓度测定组每组平行3孔，对照1孔，使用酶标仪，在517nm测各孔的吸光度值。再按下式计算DPPH自由基清除率： 步骤S3.羟基自由基清除率的测定以ddH2O为溶剂，配制系列梯度质量浓度的待测样品溶液，并根据羟自由基测试试剂盒说明书配制工作试剂，按下表2所示配比在96孔板中加样：表2羟基自由基清除率测定加样表 混匀，37℃反应1分钟准确以秒表计时，立即加入显色剂终止反应 加样后混合均匀，在室温下放置20分钟，使用酶标仪，在550nm测各孔的吸光度值，再按下式计算羟基自由基清除率： 步骤S4.HFF-1人皮肤成纤维细胞培养1细胞复苏：从液氮罐中取出含有1mLHFF-1细胞悬液的冻存管，立即放入37℃的水浴锅中解冻，再将细胞悬液转移至离心管中并加入5mL培养基混合均匀，1000rpm离心5min，弃去上清液，并加入含15％胎牛血清的DMEM培养基重悬，转移至培养皿，在37℃、5％CO2条件的培养箱中培养；2细胞传代：上述培养4-6天后，当细胞密度在80％-90％之间时，进行细胞传代；从细胞培养箱中取出培养皿，弃去培养皿中的上清液，用PBS冲洗，加入2mL的0.25％胰酶，于培养箱中消化1-2min，在显微镜下观察消化情况，当细胞变圆且不再贴壁时，迅速加入DMEM完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞，当细胞完全脱落时，将细胞液转移至离心管中1000rpm离心5min，弃去上清液，加入DMEM培养基重悬细胞，弃去部分重悬液后，将剩余部分转移至培养皿中，补加足量的DMEM培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中培养；3细胞冻存：从细胞培养箱中取出培养皿，弃去培养皿中的上清液，用PBS冲洗，加入2mL的0.25％胰酶，于培养箱中消化1-2min，在显微镜下观察消化情况，当细胞变圆且不再贴壁时，迅速加入DMEM完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞，当细胞完全脱落时，将细胞液转移至离心管中1000rpm离心5min，弃去上清液，加入50％DMEM完全培养基、40％胎牛血清和10％的DMSO，将细胞悬液转移至冻存管中，放入冻存盒，在-80℃冰箱中放置24h后，将冻存管转移至液氮中。步骤S5.白茶提取物对氧化损伤细胞的修复作用1H2O2诱导人皮肤成纤维细胞氧化损伤模型建立；2对氧化损伤细胞的修复作用。步骤S6.进行数据统计采用GraphPadPrism9软件进行数据统计、差异性分析及作图，并将实验数据在图表中以均值±SEM表示，差异性分析使用ANOVA方法，p＜0.05即为有统计学差异；图中*表示p＝0.01-0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001，****表示p＜0.0001。

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