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申请/专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日：2021-11-13
公开（公告）日：2024-04-19
公开（公告）号：CN114106113B
主分类号：C07K14/015
分类号：C07K14/015;C12N15/866;A61K39/23;A61P31/20
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.04.19#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开
摘要：本发明公开了一种表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒、制备方法及应用，所述重组杆状病毒的保藏编号为：CCTCCNo:V202178。本发明通过将毒株的VP2基因克隆至载体pVL1392中，将重组质粒和flashBac‑ultra杆状病毒基因共转染sf9细胞，获得表达VP2蛋白的重组杆状病毒。猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒疫苗能够诱导较强的免疫应答，能提供针对猪细小病毒的临床保护并抑制病毒在机体内的复制，其免疫原性与保护效力和商品疫苗相当。该方法制备VP2蛋白简便、生产周期短、免疫效力强。
主权项：1.一种猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒疫苗，其特征在于，将保藏编号为CCTCCNo:V202178的重组杆状病毒按照MOI为0.05感染昆虫细胞，感染120h后离心收获沉淀，破碎后上清经镍柱亲和层析纯化处理，抗原与Gel02佐剂配比4：1乳化制得疫苗；所述保藏编号为CCTCCNo:V202178的重组杆状病毒的制备方法包括如下步骤：S1：根据PPV-NADL-2株的核酸，根据昆虫细胞嗜性优化合成携带6×His标签的VP2核酸一，其核苷酸序列为SEQIDNo:1；S2：设计引物，获得S1中优化合成的VP2核酸一的上游和下游引物序列；S3：进行PCR扩增并添加分泌肽和kozak序列，获得扩增后的VP2核酸二，其核苷酸序列为SEQIDNo:2；S4：将扩增后的VP2核酸二与杆状病毒载体连接、转化，获得携带有VP2核酸二的重组质粒；S5：用重组质粒和杆状病毒DNA共转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；S4具体为：将目的片段和pVL1392载体分别进行BglⅡ、NotⅠ双酶切，回收清洁后连接VP2序列二和载体，转化TOP10感受态细胞，筛选阳性克隆，提取重组质粒；S5具体为：利用脂质体转染法，将提取的重组质粒和flashBac-ultraDNA转染sf9细胞，28℃培养，120h收获细胞培养上清，获得重组杆状病毒，保存于4℃。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏南农高科技股份有限公司 一种表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒、制备方法及应用
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