申请/专利权人：闻庆平

申请日：2022-03-22

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114561338B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12Q1/02;C12M3/00;C12M1/04;C12M1/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.06.17#实质审查的生效;2022.05.31#公开

摘要：本发明提供一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及其应用。为了克服现有细胞实验无法重现肺气血屏障基质结构，无法在组织层面上、蛋白水平上、基因水平上以及超微结构上反应肺气血屏障在损伤或修复过程及机制，以及无法重现肺气血屏障损伤及修复过程等缺陷，本申请提出将精准肺切片置于含有脂多糖的培养基的培养模具中培养建立得肺气血屏障损伤模型。通过该模型不仅能够实时动态观察肺气血屏障损伤及修复过程，还可将其用于探究肺气血屏障损伤后药物修复机制、用于开发或筛选用于修复肺气血屏障损伤的药物，并可为用于修复肺气血屏障损伤的药物提供一种更准确的评价方法。

主权项：1.一种肺气血屏障损伤模型的建立方法，其特征在于，将精准肺切片置于含有脂多糖的培养基的培养模具中培养建立得所述的肺气血屏障损伤模型，向所述的培养模具中连续地通入所述的含有脂多糖的培养基并使所述的含有脂多糖的培养基连续地从所述的培养模具中流出，以使所述的培养模具中所述的含有脂多糖的培养基的量保持恒定，所述的培养模具包括具有能够容纳所述精准肺切片的容纳腔的培养室，所述的培养室的顶部设有能够打开和关闭的密封盖，所述的培养室的侧壁设有用于向所述容纳腔输入培养基的液体流入通道、用于将所述容纳腔内的培养基输出的液体流出通道、用于向所述容纳腔通入气体的气体流入通道和用于将所述容纳腔内的气体输出的气体流出通道，所述的培养室内的培养基的液面高度小于所述的气体流入通道与所述的侧壁的连通处到所述的培养室的底部的距离；所述的培养室内的培养基的液面高度大于所述的液体流入通道与所述的侧壁的连通处到所述的培养室的底部的距离，所述的液体流入通道与所述的侧壁的连通处和所述的液体流出通道与所述的侧壁的连通处距离所述的培养室的底部一段距离，所述的培养模具还包括设置在所述容纳腔内的限位部件，所述的限位部件的底部设有多孔膜，所述的多孔膜和所述的容纳腔的底部之间存在400~600μm的间隙，所述的多孔膜与所述精准肺切片相接触且所述限位部件使所述精准肺切片平铺固定在所述多孔膜和所述容纳腔的底面之间，所述限位部件与所述培养室相可拆卸地连接，所述的限位部件包括侧壁，所述的侧壁的底部与所述的多孔膜相固定连接，所述的侧壁上设有开口，所述的侧壁的上端部上设有挂耳，所述容纳腔的侧壁上设有凸起，所述凸起与所述挂耳相配合以支撑所述限位部件，所述容纳腔的底面为平面，所述容纳腔内培养基的液面高于所述的开口的底部且低于所述的侧壁的顶部，所述的侧壁为透光透气材质，所述的多孔膜的孔径小于等于3μm，所述的多孔膜为透明材质，所述的培养基能够穿过所述的多孔膜，所述的精准肺切片的细胞不能穿过所述的多孔膜，所述的精准肺切片静态附着在所述的多孔膜的表面形成复合体，所述的复合体浸没在培养基中，所述的培养模具还包括与所述的液体流入通道相连通的微流泵，所述的培养模具还包括与所述的气体流入通道相连通的气泵，所述的脂多糖的终浓度为80~120ngmL，所述的精准肺切片在所述的含有脂多糖的培养基中的培养时间为18~48h，所述的精准肺切片的厚度为100~300μm，所述的培养基为DMEM培养基，所述的培养基中还含有30~60UmL青霉素、30~60UmL链霉素和5~20%胎牛血清。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 闻庆平 一种肺气血屏障损伤模型、其建立方法及其应用

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