申请/专利权人：杭州准星医学科技有限公司

申请日：2022-07-19

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN115161279B

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783;C12N5/0789

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.10.28#实质审查的生效;2022.10.11#公开

摘要：本发明提供了一种用于培养胸腺类器官的培养基制备方法及胸腺类器官的培养方法，旨在解决采用现有的培养基培养的人工胸腺类器官主要停留在T细胞发育早期阶段的问题。培养基制备方法，包括：将PluronicF127、透明质酸和聚乙二醇采用超纯水共溶，搅拌形成微球形的凝胶；向凝胶内加入空气，使凝胶内均匀布满微米级气泡；静置使微米级气泡逐渐过度为纳米级气泡，并使得纳米级气泡稳定储存于凝胶中，得到微气泡凝胶；将滋养细胞与微气泡凝胶按照体积比为1∶1‑1∶10的比例混合；所述滋养细胞包括两株体积比为1∶1‑1∶4的OP9‑DLL1细胞和MS5‑DLL1细胞；滋养细胞OP9‑DLL1、滋养细胞MS5‑DLL1与微气泡凝胶的结合，可以使T细胞的发育到达成熟的阶段。

主权项：1.一种用于培养胸腺类器官的培养基制备方法，其特征在于，包括：S100、将PluronicF127、透明质酸和聚乙二醇采用超纯水共溶，搅拌形成微球形的凝胶；S200、向凝胶内加入空气，使凝胶内均匀布满微米级气泡；静置使微米级气泡逐渐过度为纳米级气泡，并使得纳米级气泡稳定储存于凝胶中，得到微气泡凝胶；S300、将滋养细胞与微气泡凝胶按照体积比为1:1-1:10的比例混合；所述滋养细胞包括两株体积比为1:1-1:4的OP9-DLL1细胞和MS5-DLL1细胞；在步骤S100中，所述将PluronicF127、透明质酸和聚乙二醇采用超纯水共溶的步骤具体包括：将PluronicF127用超纯水溶解得到PluronicF127溶液；透明质酸用超纯水溶解得到透明质酸溶液；将PluronicF127溶液加入到透明质酸溶液中，然后用聚乙二醇400将PluronicF127、透明质酸和聚乙二醇400的总质量分数补足至100%；其中，所述PluronicF127的质量分数为5%-45%，所述透明质酸的质量分数为30%-60%；所述质量分数为每100ml中所包含的克数；在步骤S100中，所述搅拌形成微球形的凝胶的步骤具体包括：300-1500gmin的搅拌速度磁力搅拌2小时，形成粒径大于100um的球形的凝胶；在步骤S200中，所述向凝胶内加入空气，使凝胶内均匀布满微米级气泡；静置使微米级气泡逐渐过度为纳米级气泡，并使得纳米级气泡稳定储存于凝胶中，得到微气泡凝胶的步骤具体包括：通过鼓泡法向凝胶内以100-250mLmin的气流速度加入空气2-8小时，使凝胶内均匀布满微米级气泡，静置10h-24h使微米级气泡逐渐过度为10-100nm的纳米级气泡，并使得纳米级气泡稳定储存于凝胶中，形成空气饱和的微气泡凝胶；在步骤S200和步骤S300之间，还包括将微气泡凝胶导入搅拌池中以5000-10000gmin进行搅拌，使微气泡凝胶中气泡稳定的步骤。

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