申请/专利权人：北京医院

申请日：2024-01-17

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117925787A

主分类号：C12Q1/6841

分类号：C12Q1/6841;C12Q1/682

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明涉及DNA荧光原位检测领域，提供一种基于“内‑外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统，基于染色体本身串联重复序列的多拷贝特征用于“内部”信号放大，通过在sgRNA骨架序列中插入多个MS2RNA适配体序列用于“外部”信号放大，建立了一种基于CRISPRdCas9的“内‑外”双重信号放大系统，可用于染色体的快速、多色原位成像；本方法只需要使用一种dCas9蛋白、一种MS2‑sgRNA信号放大系统和多种颜色的MCP荧光蛋白，即可实现使用单一信号放大系统进行多色成像的目的，减少了多种蛋白和信号放大系统的设计成本；本发明的设计达到了使用“非酶”信号放大方法提高检测灵敏度的目的，可用于46条人类染色体特异性串联重复序列的原位检测，检测效率90%，能够在3~4h内完成检测。

主权项：1.一种基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统，其特征在于，包括检测体系，所述检测体系包括D10A和H840A核酸酶结构域双突变的S.pyogenesCas9蛋白，即dCas9，携带2～16拷贝MS2RNA适配体的sgRNA和MCP荧光蛋白；所述基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统用于对人源固定细胞中的46条染色体进行原位检测；所述基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统将染色体本身串联重复序列的多拷贝特征作为第一重“内部”信号放大，将携带多拷贝MS2RNA适配体的sgRNA作为第二重“外部”信号放大；所述sgRNA包括原间隔序列和携带2～16拷贝MS2RNA适配体的骨架序列，所述基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统通过原间隔序列，使dCas9sgRNA复合物在全基因组中特异性识别并结合靶序列，所述基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统通过骨架序列中的MS2RNA适配体序列募集MCP荧光蛋白以进行荧光原位成像。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京医院 基于“内-外”双重信号放大的DCasFISH染色体多色原位成像系统

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