申请/专利权人：南京中医药大学;江苏亚邦中药饮片有限公司

申请日：2022-03-29

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN114732842B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;A61K36/489;G01N30/72;G01N30/86;A61P35/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.07.29#实质审查的生效;2022.07.12#公开

摘要：本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物及其质量检测方法与应用。本发明根据苦参中不同生物碱和黄酮成分的结构及其性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，色谱柱、质谱条件等分析条件。经多次实验验证表明，本发明采用UPLC‑TQ‑MS和HPLC方法能够同时对5种不同结构和类型的生物碱类化合物和4种黄酮类成分进行含量测定，该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价苦参及其提取物与制剂的质量，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。并且本发明通过实验发现苦参提取物具有很好的抗结肠癌的活性。

主权项：1.一种苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，所述的苦参提取物是通过以下方法制备得到的：取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，即得；质量检测方法包括以下步骤：步骤1生物碱对照品溶液的制备精密称取槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱，加甲醇制成生物碱混合标准储备溶液，4℃保存；步骤2黄酮对照品溶液的制备精密称取三叶豆紫檀苷、苦参酮、苦参醇I、高丽槐素，加甲醇制成黄酮混合标准储备溶液，4℃保存；步骤3供试品溶液的制备取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，进样之前过微孔滤膜；步骤4线性回归方程的建立取步骤1生物碱混合标准储备溶液和步骤2黄酮混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC-TQ-MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；步骤5含量测定取步骤3的苦参供试品溶液，注入UPLC-TQ-MS进行生物碱的分析，将峰面积代入步骤4的线性回归方程，计算供试品溶液中各生物碱成分的含量；取步骤3的苦参供试品溶液，注入HPLC进行黄酮成分的分析，将峰面积代入步骤4的线性回归方程，计算供试品溶液中各黄酮成分的含量；所述的步骤4和步骤5中测定生物碱的UPLC-TQ-MS的色谱条件为：WatersAcquityHSST3色谱柱，规格1.8μm，2.1mm，100mm；0.1％甲酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度洗脱：0～1min，15％B、1～5min，15％B→50％B、5～7min，50％B、7～10min，50％B→15％B、10～13min，15％B；流速：0.3mLmin；柱温：35℃；进样量：2μL；质谱条件：电喷雾离子化，多反应监测离子扫描模测定，主要质谱参数为：毛细管电压5500V，脱溶剂温度550℃；采用正、负离子检测模式，选择的检测离子质荷比分别为：槐果碱mz247.2996.1：苦参碱mz249.2148.3，槐定碱mz249.3152.1，氧化槐果碱mz263.3245.1，氧化苦参碱mz265.3205.2； 待测物 去簇电压V 碰撞电压V 槐果碱 40 40 苦参碱 50 40 槐定碱 50 40 氧化槐果碱 40 20 氧化苦参碱 76 40 ；步骤4和步骤5中测定黄酮的色谱条件为：Waters2695高效液相色谱仪、Waters2998DAD检测器、色谱柱：PurospherSTARLPRP-C18endcapped，规格250mm×4.6mm,5μm；流动相乙腈为A相，0.1％甲酸水溶液为B相，梯度洗脱：0-15min，5％-10％A、15-35min，10％-20％A、35-50min，20％-40％A、50-70min，40％-60％A、70-75min,60％-5％A；流速1.0mlLmin；检测波长280nm；进样量10μL；柱温30℃。

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