申请/专利权人：广西大学

申请日：2022-06-20

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN114990057B

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.09.20#实质审查的生效;2022.09.02#公开

摘要：本发明涉及细胞工程和组织工程领域，具体涉及一种水牛胎儿肌内脂肪细胞的分离培养及成脂诱导分化的方法。该方法包括：取水牛胎牛背最长肌，清洗消毒；分割水牛胎牛背最长肌组织；加入0.2%胶原酶I进行消化；加入完全培养基终止消化；对终止消化的细胞进行离心，弃掉上清，得到细胞沉淀；通过差速贴壁法纯化细胞；将纯化后的细胞在37℃、5%CO2的培养箱中培养，培养的时候2天换一次完全培养基；待细胞密度达到80%左右，更换诱导培养基，诱导2天后，再更换维持培养基，之后每2天换一次维持培养基。采用本发明方法获得水牛胎儿获得的肌内脂肪细胞，具有较高的活性和成脂分化的能力。

主权项：1.一种水牛胎儿肌内脂肪细胞分离培养及成脂诱导分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：消毒处理：先对水牛胎牛表皮进行清洗，去掉表皮，取水牛胎牛背最长肌，在无菌条件下，对牛背最长肌组织进行消毒；步骤2：分割：对消毒过的水牛胎牛背最长肌组织块进行分割；步骤3：消化：在分割后的组织块中加入0.2%胶原酶I进行消化；步骤4：筛滤：在消化后的组织加入完全培养基终止消化；步骤5：离心：对终止消化的细胞进行离心，弃掉上清，得到细胞沉淀；步骤6：纯化：将离心后的细胞重悬于完全培养基中，通过差速贴壁法纯化细胞；步骤7：培养：将纯化后的细胞在37℃、5%CO2的培养箱中培养，培养的时候2天换一次完全培养基；待细胞密度达到80%，更换诱导培养基，诱导2天后，再更换维持培养基，之后每2天换一次维持培养基；所述诱导培养基是添加了诱导分化剂的完全培养基，诱导培养基中的诱导分化剂的组分：0.5mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、1μM地塞米松、10μgmL胰岛素和1μM罗格列酮；所述维持培养基是添加了维持分化剂的完全培养基，维持培养基中的维持分化剂的组分：10μgmL胰岛素和1μM罗格列酮。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广西大学 一种水牛胎儿肌内脂肪细胞分离培养及成脂诱导分化的方法

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