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申请/专利权人：南京师范大学
申请日：2024-01-26
公开（公告）日：2024-04-30
公开（公告）号：CN117947105A
主分类号：C12P5/02
分类号：C12P5/02;C12N15/70;C12N15/52;C12N9/12;C12N9/10;C12N9/90;C12N9/02;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.17#实质审查的生效;2024.04.30#公开
摘要：本发明公开了基于异戊烯醇利用途径无细胞合成番茄红素的方法，构建表达IUP途径中合成番茄红素的七种关键的重组质粒，在大肠杆菌中进行诱导表达和超声破碎后获得富含关键酶的大肠杆菌细胞裂解液。通过外源添加合成反应所需的底物、能量和辅因子等，在体外构建无细胞代谢工程体系高效合成番茄红素。本发明首次将异戊烯醇利用途径与无细胞代谢工程相结合应用于体外合成番茄红素，该方法仅用两步磷酸化反应就代替了原有需要7步以上的MEP和MVA途径合成番茄红素的前体物质IPP和DMAPP，大大缩短了代谢通路，不会和细胞内中心碳代谢相竞争，减少了代谢过程中中间产物积累导致的毒性，利用廉价的底物高效简便的就可以高效合成番茄红素。
主权项：1.基于异戊烯醇利用途径无细胞合成番茄红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）IUP途径中合成番茄红素的七个关键酶重组质粒的构建：分别将基因片段mtipk、thim、ispA、idi、crtE、crttheB和crtI与原核表达载体进行双酶切，使用DNA连接酶进行连接，获得重组质粒pRSF-mtipk、pETDuet-thim、pET28a-ispA、pET22b-idi、pET22b-crtE、pET22b-crttheB和pET22b-crtI；（2）蛋白的诱导表达并构建体外合成番茄红素体系：将步骤（1）构建好的重组质粒在大肠杆菌中过量表达，使用超声细胞破碎仪破碎细胞并收集细胞裂解液；在含有Bis-Tris缓冲体系中加入底物、细胞裂解液以及金属离子和辅因子在体外合成番茄红素。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京师范大学 基于异戊烯醇利用途径无细胞合成番茄红素的方法
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