申请/专利权人：伊诺维康(北京)生物科技有限公司

申请日：2024-01-16

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN117947096A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N7/01;A61K39/15;A61P31/14;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.17#实质审查的生效;2024.04.30#公开

摘要：本发明提供了一种羊轮状病毒重组质粒、反向遗传学病毒拯救系统及其构建方法和应用，属于分子生物学和生物医学领域。本发明将重组质粒、辅助质粒pCMV‑868CP和Opti‑MEM混合，然后与TransIT‑LT1转染试剂混合转染至BHK‑T79细胞中；将MA104N*V工程细胞株与转染的BHK‑T79细胞混合共培养，拯救得到羊轮状病毒重组病毒株。本发明通过反向遗传学体系，成功拯救出携带或不携带分子标记的轮状病毒LLR，以及重组轮状病毒rLLR。本发明拯救得到的重组病毒为外源基因表达奠定了基础，为轮状病毒抗病毒药物、疫苗中和抗体、联合疫苗及基因治疗等的研究和应用提供了工具和思路。

主权项：1.一种羊轮状病毒重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pT7-VP1LLRV、pT7-VP2LLRV、pT7-VP3LLRV、pT7-VP4LLRV、pT7-VP6LLRV、pT7-VP7LLRV、pT7-NSP1LLRV、pT7-NSP2LLRV、pT7-NSP3LLRV、pT7-NSP4LLRV和pT7-NSP5LLRV；所述pT7-VP1LLRV的序列如SEQIDNO:108所示；所述pT7-VP2LLRV的序列如SEQIDNO:109所示；所述pT7-VP3LLRV的序列如SEQIDNO:110所示；所述pT7-VP4LLRV的序列如SEQIDNO:111所示；所述pT7-VP6LLRV的序列如SEQIDNO:112所示；所述pT7-VP7LLRV的序列如SEQIDNO:113所示；所述pT7-NSP1LLRV的序列如SEQIDNO:114所示；所述pT7-NSP2LLRV的序列如SEQIDNO:115所示；所述pT7-NSP3LLRV的序列如SEQIDNO:116所示；所述pT7-NSP4LLRV的序列如SEQIDNO:117所示；所述pT7-NSP5LLRV的序列如SEQIDNO:117所示；可将所述重组质粒中的pT7-NSP1LLRV、pT7-NSP3LLRV、pT7-NSP4LLRV和pT7-NSP5LLRV用突变质粒进行替换；所述突变质粒为pT7-muNSP1LLRV、pT7-muNSP3LLRV、pT7-muNSP4LLRV和pT7-muNSP5LLRV，该突变用于区分与原轮状病毒的区别；所述pT7-muNSP1LLRV的序列是将所述pT7-NSP1LLRV的NSP1LLRV序列第1349和1363位分别由C和T突变为T和C；所述pT7-muNSP3LLRV的序列是将所述pT7-NSP3LLRV的NSP3LLRV序列第799和811位分别由T和T突变为C和C；所述pT7-muNSP4LLRV的序列是将所述pT7-NSP4LLRV的NSP4LLRV序列第395和404位分别由A和A突变为G和T；所述pT7-muNSP5LLRV的序列是将所述pT7-NSP5LLRV的NSP5LLRV序列第298和306位分别由T和A突变为C和G。

全文数据：

权利要求：

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