申请/专利权人：山东大学

申请日：2021-01-12

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN114763552B

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N9/10;C12N1/21;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2022.08.05#实质审查的生效;2022.07.19#公开

摘要：本发明涉及一种微生物转谷氨酰胺酶的重组生产方法。该重组生产方法是将成熟MTG编码基因与前导肽Pro编码基因分别构建重组质粒，将重组质粒转化入同一宿主细胞内共表达，初步纯化后获得有活性的微生物转谷氨酰胺酶。本发明将MTG前导肽Pro与Trx蛋白融合后表达为“分子伴侣”Trx‑Pro，与成熟MTG蛋白共表达时辅助MTG正确折叠，并抑制其对重组表达宿主细胞的伤害，实现了微生物转谷氨酰胺酶的有效可溶性表达及一步法简便纯化，在经一步法简单纯化后得到初步纯化蛋白，再经反应试剂进一步处理，高效剥离“分子伴侣”Trx‑Pro，得到高纯度高活性的重组转谷氨酰胺酶，具有应用于药用蛋白修饰等方面的重要价值。

主权项：1.一种微生物转谷氨酰胺酶的重组生产方法，其特征在于，将成熟MTG编码基因与前导肽Pro编码基因分别构建重组质粒，所述成熟MTG编码基因与前导肽Pro编码基因的重组质粒的质粒载体为含有T7启动子的载体，两种重组质粒的质粒载体可以在同一宿主细胞中共存，将重组质粒转化入同一宿主细胞内共表达，初步纯化后获得有活性的微生物转谷氨酰胺酶；所述成熟MTG的C端连接His6标签，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述前导肽Pro的N端连接有大肠杆菌硫氧还蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东大学 一种微生物转谷氨酰胺酶的重组生产方法

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