申请/专利权人：广东省第二人民医院

申请日：2019-01-02

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN111398573B

主分类号：G01N33/50

分类号：G01N33/50;A01K67/033

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2021.11.26#实质审查的生效;2020.07.10#公开

摘要：本发明为一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法。利用此线虫的EGFR基因DNA片段1323aa与人体EGFR的cDNA的编码，通过PCR技术扩增、克隆、组装得到LET23：：hEFGR1388aa片段。将此hEFGR上的21外显子L858R点及20外显子T790M点突变分别得到LET23：：hEGFR[L858R]药物敏感性基因和LET23：：hEGFR[T790M‑L858R]耐药型基因，再通过酶剪切及转基因技术，将上述两种LET23：：hEGFR‑TK质粒嵌合在LET23基因序列LET‑23N至LET‑23C之间形成人体化LET23：：hEGFR‑TK[L858R]1323aa线虫模型和人体化LET23：：hEGFR‑TK[T790M‑L858R]1323aa线虫模型。该方法具有体内外可比性强、成本低，效率高等优点，可为肺癌EGFR‑TKIs耐药后的药物治疗提供实验依据。

主权项：1.一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1线虫的冻存同步化后收集L1期线虫，离心，弃上清，浓缩，加入冻存管中，置于-80℃冰箱保存；2线虫的传代与培养取出冻存管，20℃迅速解冻，倒在NGM平板上，置于20℃生化培养箱中培养；3线虫的同步化将培养基表面的孕虫和虫卵用缓冲液洗下，收集于离心管中，离心吸弃上清，解液，弃上清，20℃下培养24小时得到L1期线虫；4液体板的制备弃去LB液体培养基的上清，将大肠杆菌OP50置于无菌48孔板；5线虫的EGFR-TKIs耐药模型的建立将给药后48孔板中的线虫液体转移到EP管中，离心吸弃上清，加2mM叠氮钠溶液麻醉，置于浮游生物计数板上，在倒置显微镜下观察并计算突变体线虫的数目和线虫总数；6对线虫模型给药，观察对比给药前和给药后线虫假阴门突变型药物作用3天后进行观察，根据转基因秀丽隐杆线虫假阴门突变型变化的结果。

全文数据：

权利要求：

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