申请/专利权人：“比奥卡特”封闭式股份公司

申请日：2017-07-04

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN110023335B

主分类号：C07K16/28

分类号：C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;A61K39/395

优先权：["20160713 RU 2016128487"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2019.08.09#实质审查的生效;2019.07.16#公开

摘要：本发明涉及生物技术，并且包含分离的单克隆抗体，特别是人单克隆抗体，其以高亲和力特异性结合PD‑1。根据本发明的抗体可以是嵌合的、人源化的或人抗体，或其抗原结合片段，并且可以用作肿瘤学和免疫肿瘤学中的药物制剂，用于治疗与各种细胞增殖或发育障碍有关的疾病。本发明还涉及所述抗体的生产方法，以及使用所述抗体治疗人类疾病的方法。

主权项：1.一种抗体或其抗原结合片段，其具有与人PD-1受体结合的能力，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含由SEQIDNO:1表示的重链CDR1H-CDR1氨基酸序列、由SEQIDNO:2表示的重链CDR2H-CDR2氨基酸序列和由SEQIDNO:3表示的重链CDR3H-CDR3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含由SEQIDNO:4表示的轻链CDR1L-CDR1氨基酸序列、由SEQIDNO:5表示的轻链CDR2L-CDR2氨基酸序列和由SEQIDNO:6表示的轻链CDR3L-CDR3氨基酸序列。

全文数据：抗-PD-1抗体、其生产方法及其使用方法技术领域本发明涉及生物技术，并且提供了分离的单克隆抗体，特别是与高亲和力PD-1特异性结合的人类单克隆抗体。本发明的抗体可以是嵌合的、人源化的或者人类抗体、或其抗原结合片段，可在肿瘤学和免疫肿瘤学中被用作药物制剂，并且用于治疗与各种细胞增殖或者发育障碍相关的疾病。本发明还涉及所述抗体的生产方法以及利用所述抗体治疗人类疾病的方法。背景技术程序性死亡1PD-1蛋白质是CD28受体家族的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达阿加塔等人，同上；冈崎等人，2002免疫学新观点，14:391779-82；贝内特等人，2003免疫学杂志，170:711-8。在加入单克隆抗体之后通过提高T细胞增殖的功能性影响检测了该家族的最初成员CD28和ICOS霍特夫等人，1999自然，397:263-266；汉森等人，1980免疫原性，10:247-260。通过筛选凋亡细胞中的差异表达检测了PD-1石田等人，1992欧洲分子生物学组织期刊，11:3887-95。通过分别在细胞毒性T-淋巴细胞和TH1细胞中筛选差异表达检测了该家族的其他成员CTLA-4和BTLA。CD28、ICOS和CTLA-4均具有使其同型二聚体化的不成对半胱氨酸残基。相反，人们相信PD-1作为单体存在，缺少在其他CD28家族成员中特有的不成对半胱氨酸残基。PD-1是55kDa的I型跨膜蛋白，其为Ig基因超家族的一部分阿加塔等人，1996国际免疫学，8:765-72。PD-1包括接近膜的免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM和远离膜的基于酪氨酸的转换基序ITSM托马斯，M.L.1995实验医学期刊，181:1953-6；维维耶，戴伦,M1997当代免疫学，18:286-91。虽然在结构上类似于CTLA-4，但是PD-1缺少对于B7-1和B7-2结合关键的MYPPY基序。已经检测到PD-1具有两个配体，PD-L1和PD-L2，显示出其在与PD-1结合之后负调节T细胞活化弗里曼等人，2000实验医学期刊，192:1027-34；拉齐曼等人，2001国际免疫学，2:261-8；卡特等人，2002欧洲免疫学期刊，32:634-43。PD-L1和PD-L2二者均为B7同一性物，其与PD-1结合，但不与CD28家族的其它成员结合。PD-L1是一种PD-1配体，其在各种人癌症中都丰富董等人，2002自然医学，8:787-9。PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润淋巴细胞的数量的减少、T细胞受体介导的增殖的减少以及癌症细胞从免疫监视逃逸董等人，2003分子医学期刊，81:281-7；布朗克等人，2005癌症免疫学免疫疗法，54:307-314；小西等人，2004临床癌症研究，10:5094-100。可以通过抑制PD-L1与PD-1的局部相互作用来逆转免疫抑制，当PD-L2与PD-1的相互作用被阻断时该效果是累加的岩井等人，2002美国国家科学院院刊，99:12293-7；布朗等人，2003免疫学杂志，170:1257-66。PD-1是CD28家族的抑制性成员，并且在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达阿加塔等人，同上；冈崎等人，2002免疫学新观点，14:391779-82；贝内特等人，2003免疫学杂志，170:711-8。PD-1缺陷型动物易于形成各种自身免疫疾病，包括自身免疫性心脏病及伴有关节炎和肾炎的狼疮样综合征西村等人，1999免疫，11:141-51；西村等人，2001，科学，291:319-22。此外，发现PD-1在自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病GVHD、I型糖尿病和类风湿性关节炎中起作用萨拉马等人，2003实验医学期刊，198:71-78；奥尔加和阿拉尔孔-里克尔梅，2004人类分子遗传学，13:R143；尼尔森等人，2004狼疮，13:510。在鼠类B细胞肿瘤系中，表明PD-1的ITSM是阻断BCR介导的Ca2+流通和下游效应子分子的酪氨酸磷酸化所必需的冈崎等人，2001美国国家科学院院刊，98:13866-71。现今，存在许多抗-PD-1抗体，比如纳武单抗nivolumabBMS-936558、MDX-1106或者ONO-4538；BMS、派姆单抗pembrolizumab默克公司。现有技术公开了包括根据WO2006121168纳武单抗、BMS的特定氨基酸序列的单克隆抗-PD-1抗体，其表现出一些有用的性质，比如与人PD-1结合的高亲和力，但是与人CD28、CTLA-4或者ICOS没有显著的交叉反应性。此外，已经显示这些抗体调节免疫应答。因此，本申请还描述了使用抗-PD-1抗体调节免疫应答的方法。具体而言，本发明提供了一种使用抗-PD-1抗体抑制肿瘤细胞的体内生长的方法。现有技术还公开了WO2009114335派姆单抗，默克公司中所述的分离的PD-1结合蛋白，其包括第一可变区和第二可变区。第一可变区是重链，包括各种CDR，第二可变区是轻链，也包括各种CDR。因此，开发识别PD-1的抗体以及使用这种试剂的方法是重要的。本发明提供了与PD-1特异性结合并且具有功能活性、亲和力、特异性和测试分析中的稳定性的有利特征的抗体。发明内容本发明涉及与PD-1特异性结合的人类单克隆抗体。这种抗体可用于治疗肿瘤和传染性疾病。与用于治疗所述疾病的当前方法包括利用抗体治疗相比，相信本发明的单克隆抗体提供了最佳的临床反应。一方面，本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其能够与人PD-1受体结合，并且包括与SEQIDNO:3的序列至少75％同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明涉及包括SEQIDNO:3的氨基酸序列的抗体或其片段。在一些实施方案中，本发明涉及包括以下的抗体或其片段：-与SEQIDNO:7的序列至少75％同源的重链可变区的序列，和-与SEQIDNO:8的序列至少75％同源的轻链可变区的序列。在一个实施方案中，本发明涉及包括SEQIDNO:1-3的氨基酸序列的抗体或其片段。在一些实施方案中，结合片段竞争结合或者结合至与包括SEQIDNO:7的氨基酸序列的结合区相同的表位。在一些实施方案中，结合片段与SEQIDNO:7的氨基酸序列至少90％同源。在本发明的一个实施方案中，结合区包括SEQIDNO:7的氨基酸序列。在本发明的一个实施方案中，结合区可以是人源化的。在本发明的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段的特征在于其涉及人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体或其片段具有与SEQIDNO:9的序列至少90％同源的重链序列。在一些实施方案中，抗体或其片段具有与SEQIDNO:10的序列至少90％同源的轻链序列。在一些实施方案中，抗体或其片段的Fc恒定部分包括与天然序列相比减少或者消除任意效应子功能ADCC、ADCP或者CDC的任何突变。在一些实施方案中，抗体或其片段的Fc恒定部分包括提高动物或者人药物动力学参数比如t12β小时或者Cmaxμgml的突变。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有以下性质的至少一种：a聚集稳定性：在浓度为10mgml以上以及储存温度T＝4℃的溶液中经过6个月以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；b聚集稳定性：在浓度为10mgml以上以及温度升高至37℃的溶液中经过2周以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；c聚集稳定性：在浓度为10mgml以上以及温度升高至50℃的溶液中经过6个小时以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；d当结合至人PD-1时，解离常数KD不大于10-9M；e当结合至人PD-1时，动力学缔合常数kon1Ms为至少1051Ms；f当结合至人PD-1时，动力学解离常数dis1s为不大于10-41s。一方面，本发明涉及双特异性抗体，其包括上述抗体的任何抗原结合片段。一方面，本发明涉及编码根据权利要求1-14的任一项所述的抗体或其抗原结合区的分离的核酸分子。一方面，本发明涉及一种表达载体，其包括本文所述的分离的核酸分子的任一种。一方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包括本文所述的任一核苷酸序列。一方面，本发明涉及一种用于生产宿主细胞的方法，该方法包括利用表达载体转染合适的干细胞。一方面，本发明涉及本文所述的任何抗体的制备方法，该方法包括生产宿主细胞、在足以生产所述抗体或其片段的条件下培养宿主细胞、然后分离和纯化所获得的抗体或其活性片段。在一些实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，包括以上所述的抗体或其片段，与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或者载体组合。在一些实施方案中，该药物组合物意欲用于治疗肿瘤和传染性疾病。一方面，本发明涉及用于抑制需要该抑制的对象中的PD-1的生物活性的方法，其包括施用有效量的如上所述的任何抗体。一方面，本发明涉及一种用于治疗亟需该治疗的患者的方法，该方法包括施用本文所述的任何抗体或者抗原结合片段或者药物组合物。附图简述图1是人类原始组合文库的合成方案。图2是用于克隆Fab噬菌体展示文库A的噬菌粒以及用于生产FabB的表达质粒。图3是在还原条件下3A、12％SDS-PAGE、在非还原条件下3B、8％SDS-PAGE的BCD-100电泳图。图4是BCD-100与PD1和其他抗原的相互作用的免疫酶测定。图5是通过Jurkat-NFAT-PD1报告细胞系中的抗PDI抗体再激活NFAT信号传导。图6是在葡萄球菌肠毒素的存在下通过人全血中的抗PD1抗体刺激IL-2的生产。图7是分析Jurkat-PD1细胞系上的抗PD1抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性ADCC。图8是在OctetRED96上分析BCD-100候选物与FcRn和Fcγ受体的相互作用。图9是免疫酶测定BCD-100与不同生物体的PD1受体的相互作用。图10是免疫酶测定BCD-100与CD28家族受体的相互作用。图11是在OctetRED96上分析BCD-100候选物与人和食蟹猴PD1受体的相互作用。图12是BCD-100分子的热应力50℃、12h的结果。本发明的公开内容定义和通用方法除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可用于实践或测试本发明的实施方案，但下文描述了示例性方法和或材料。本文所提及的所有出版物和其他参考文献都通过引用以其整体并入本申请。如果出现矛盾，则应以此描述包括定义为准。尽管本文参考了许多现有技术出版物，但这些参考文献并非承认这些文献形成本领域公知常识的一部分。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。通常，细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、分析化学、有机合成化学、医学和药学化学以及本文所述的蛋白质和核酸的杂交和化学的分类和方法是公知的，并且被本领域技术人员广泛使用。如本领域已知的，或如本文所述，根据制造商的说明书进行酶反应和纯化方法。贯穿本公开和实施方案，词语“由......组成”和“包含”或其变体，比如“由......组成consistsconsisting”、“包含包括comprisescomprising”应理解为暗示包括阐明的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。涉及抗体的定义如本文所使用的，术语“程序性死亡1”、“可编程的细胞死亡1”、“PD-1蛋白质”、“PD-1”、“CD279”、“PDCD1”、“hPD-1”和“hPD-I”是可互换的，并且是指人PD-1的任何变体、同种型、物种同一性物及其类似物，其包含至少一个与PD-1的共同表位。术语“免疫应答”、“自身免疫应答”和“自身免疫炎症”是指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由所述细胞或肝细胞产生的可溶性大分子的作用包括抗体、细胞因子和补体，其产生自选择性损害、破坏或消除侵入的病原体、感染病原体、癌性细胞的细胞或组织，或者在自身免疫或病理性炎症的情况下，来自人体的正常细胞或组织。本文所使用的术语“结合分子”包括抗体、免疫球蛋白和抗体的抗原结合片段。本文所使用的术语“抗体”Ab或者“免疫球蛋白”Ig意欲指的是四聚体，其包括两条重H链大约50-70kDa和两条轻L链大约25kDa，它们通过二硫键连接。每条重链由重链可变区VH和重链恒定部分CH组成。每条轻链由轻链可变区VL和轻链恒定部分CL组成。VH和VL域可被进一步细分为高变性区域，称为“互补决定区”CDR，散布着更保守的区域，称为“框架区”FR。每条VH和VL由三个CDR如本文所使用的H-CDR表示重链CDR，以及如本文所使用的L-CDR表示轻链CDR和四个FR组成，其从氨基末端到羧基末端以下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。氨基酸对每个区域的归属可以根据的定义来进行勒弗朗等人，发育和比较免疫学，271:55-772003；或者卡巴特的定义，免疫学相关的蛋白质序列，国立卫生研究院，贝赛斯达，马里兰州1987和1991；乔西亚&莱斯克，分子生物学期刊，196:901-9171987；或者乔西亚等人，自然，342:878-8831989。如本文所使用的，术语“抗体”和“免疫球蛋白”是可互换的。本文所使用的术语抗体的“抗原-结合部分”或者“抗原部分”、“片段”意欲指的是抗体的一个或多个部分或者片段，其保持与抗原例如，PD1特异性结合的能力。已经表明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的一些片段来执行。包含在术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括iFab片段，由VL、VH、CL和CH1域组成的单价片段；iiFab2片段，包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；iii由VH和CH1域组成的Fd片段；iv由抗体的单臂的VL和VH域组成的Fv片段；v单域抗体*dAb片段，其由VH域组成；和vi能够特异性与抗原结合的分离的互补决定区CDR。此外，尽管Fv片段、VL和VH的两个域由单个基因编码，但它们可以通过合成接头使用重组方法连接，合成接头使得它们能够被制成单链蛋白，其中VL和VH区配对形成单价分子已知为单链FvscFv。本发明还提供了抗原-结合分子，其包括VH和或VL。在VH的情况下，分子还可以包含CH1、铰链、CH2或CH3区中的一个或多个。这种单链抗体也意在包括在抗体的术语“抗原-结合部分”内。还包括其他形式的单链抗体，例如双抗体diabodies。双抗体是小的二价的和双特异性的抗体，其中域VH和域VL在相同的多肽链VH-VL上表达。通过使用太短的接头以至于同一链上的两个域之间不能配对，该域被迫与另一个链的互补域配对，并产生两个抗原结合位点。抗体区域，例如Fab-和Fаb'2片段可以使用常规技术由全抗体来制备例如，全抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶水解。此外，抗体、其部分和免疫粘附分子可以使用标准重组DNA技术例如，如本文所述的来制备。术语“重组抗体”意指由细胞或细胞系表达的抗体，其包括编码抗体的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列不与细胞天然相关。如本文所使用的，术语“变异抗体”意指如此抗体：该抗体的氨基酸序列通过基于亲本抗体的序列增加、缺失和或取代一个或多个氨基酸残基而不同于其“亲本”抗体的氨基酸序列。在优选的实施方案中，与亲本抗体相比，变异抗体包括至少一个或多个例如，一至十二个、例如，二、三、四、五、六、七、八或九、十、十一或十二个；在一些实施方案中，变异抗体包括从1至大约10个氨基酸的增加、缺失和或取代。在一些实施方案中，这种增加、缺失和或取代在变异抗体的CDR中进行。关于变异抗体的序列的同一性或同一性性在本文中定义为，在对齐序列并引入缺口如果需要以实现最大百分比的序列同一性之后，与亲本抗体残基同一性的变异抗体序列中的氨基酸残基百分比。变异抗体保留与相同抗原结合的能力，优选结合至与亲本抗体结合的表位；在一些实施方案中，至少一种性质或生物活性优于亲本抗体。例如，与亲本抗体相比，变异抗体可具有例如更强的结合亲和性、更长的半衰期、更低的IC50或增强的抑制抗原生物活性的能力。本文特别关注的变异抗体是与亲本抗体相比显示出生物活性增强至少2倍优选至少5倍、10倍或20倍的变异抗体。在广义上，术语“嵌合抗体”意在表示包括一个抗体的一个或多个区域以及一个或许多其他抗体的一个或多个区域通常是部分人和部分非人的抗体的抗体，即部分源自非人动物，例如小鼠、大鼠等害虫，或骆驼科动物，例如美洲驼和羊驼。嵌合抗体通常优于非人抗体，以降低人抗-抗体免疫应答例如，在小鼠抗体的情况下，是人抗小鼠抗体免疫应答的风险。典型的嵌合抗体的实例是其中可变区序列是鼠科动物序列、而恒定部分序列是人的一种。在嵌合抗体的情况下，可以对非人类部分进行进一步改变以使抗体人源化。术语“人源化”意在表示如此事实：当抗体具有完全或部分非人来源，例如，分别用关注的抗原免疫小鼠或美洲驼而获得的小鼠或美洲驼抗体，或者是基于小鼠或美洲驼的这种抗体的嵌合抗体时，可能取代某些氨基酸，特别是在重链和轻链的框架区和恒定域中，以避免或最小化人中的免疫应答。抗体主要通过位于六条重链和轻链CDR中的氨基酸残基与目标抗原相互作用。由于这个原因，CDR内的氨基酸序列在个体抗体之间的变异远大于CDR之外的那些。因为CDR序列是大多数抗体-抗原相互作用的原因，所以可能表达模拟特定天然存在的抗体的性质的重组抗体，或更一般地，例如通过由移植到来自不同抗体的框架序列上的特定抗体来构建表达CDR序列的表达载体的具有所述氨基酸序列的任何特定抗体的性质。结果，可以使非人抗体“人源化”，并且在很大程度上保持初始抗体的结合特异性和亲和力。尽管不可能精确预测免疫原性并且因此不能精确预测特定抗体的人抗-抗体反应，但非人抗体通常比人抗体更具免疫原性。嵌合抗体其中外来的例如，害虫或骆驼科恒定区已被人源的序列取代显示的免疫原性通常低于完全外源的，并且治疗性抗体的趋势是人源化的或完全人抗体。因此，嵌合抗体或非人来源的其他抗体可被人源化以降低人抗-抗体反应的风险。对于嵌合抗体，人源化通常涉及修改可变区序列的框架区域。作为互补决定区CDR的一部分的氨基酸残基通常不会借助于人源化进行修饰，尽管这在某些情况下可能是期望的，以便修饰CDR的单个氨基酸残基，例如，以便删除糖基化位点、脱酰胺位点、天冬氨酸异构化位点或不需要的半胱氨酸或蛋氨酸残基。通过将寡糖链连接到三肽序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr中的天冬酰胺残基来进行N-连接糖基化，其中X可以是除Pro之外的任何氨基酸。去除N-糖基化位点可以通过用其他的残基使Asn或SerThr残基突变、优选通过保守取代来实现。取决于诸如pH和表面暴露的因素，可以发生天冬酰胺和谷氨酰胺残基的脱酰胺作用。当主要存在于序列AsnGly中并且在较小程度上存在于其他二肽序列如Asn-Ala中时，天冬酰胺残基特别容易脱酰胺。假设CDR序列包括这样的脱酰胺位点，特别是Asn-Gly，则可能需要除去该位点，通常通过保守取代来删除所涉及的残基之一。用于人源化抗体序列的许多方法在本领域是已知的；例如，参见Almagro&Fransson,FrontBiosci.13:1619-16332008的综述。当例如小鼠嵌合抗体涉及识别人种系基因对应物为小鼠可变区基因并将小鼠CDR序列移植到该框架中时，一种常用的方法是CDR移植。CDR移植可以基于Kabat的CDR定义，尽管最后一版马格德莱娜-伯泽兰等人，肿瘤学血液学评论综述64:2102252007表明国际ImMunoGeneTicsinformationwww.imgt.org定义可以改善人源化结果参见勒弗朗等人，发育和比较免疫学，27:55-772003。在一些情况下，与获得CDR的亲本抗体相比，CDR移植可以降低CDR移植的非人抗体的结合特异性和亲和力，并因此降低其生物活性。可以在CDR移植抗体的选定位置通常在框架区中处引入回复突变其有时称为“框架区修复”，以恢复亲本抗体的结合特异性和亲和力。可以使用文献和抗体数据库中可获得的信息来进行识别可能的回复突变的位置。作为回复突变的候选物的氨基酸残基通常是位于抗体分子表面的那些，而被埋藏或具有低的表面暴露程度的残基通常不会被改变。用于CDR移植和回复突变的替代人源化技术是表面重塑，其中保留非人源的非表面暴露的残基，而将表面残基改变为人残基。在某些情况下，还可能需要改变一个或多个CDR氨基酸残基以改善与靶表位的结合亲和力。这被称为“亲和力成熟”，并且可以任选地与人源化相关地进行，例如，在抗体的人源化导致降低的结合特异性或亲和力并且不可能仅通过回复突变充分改善结合特异性或亲和力的情况下。各种亲和力成熟方法在本领域是已知的，例如伯克斯等人，美国国家科学院院刊，94:412–4171997描述的体外扫描饱和诱变方法和吴等人，美国国家科学院院刊，95:603760421998的逐步体外亲和力成熟方法。术语“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”意指蛋白质、多肽或抗体，由于来源或其衍生物的来源，其1不涉及天然伴随的组分这些组分在它的天然状态时伴随它，2不含来自相同物种的其他蛋白质，3由来自不同物种的细胞表达，或4本质上不发生。因此，在与其天然来源的细胞不同的细胞系统中化学合成或合成的多肽将与其天然伴随的组分“分离”。使用本领域熟知的蛋白质纯化技术，通过分离，蛋白质也可以基本上不含天然伴随的组分。如本文所使用的，术语“增殖germinal”意指抗体基因和基因片段的核苷酸和氨基酸序列以及它们如何通过生殖细胞从亲代传递给子代。种系序列不同于在成熟的B细胞中编码抗体的核苷酸序列，其在B细胞的成熟过程中由于重组和超突变而被改变。“利用”特定种系序列的抗体具有与种系核苷酸序列或氨基酸序列对应的核苷酸和氨基酸序列，其比任何其他种系核苷酸或氨基酸序列更完全地对应于该核苷酸和氨基酸序列。术语“亲和力”意指衡量抗原和结合分子例如，抗体之间的吸引力。吸引抗原的结合分子的固有能力通常表示为特定结合分子-抗原相互作用的结合亲和力平衡常数KD。当KDBIOCAD股份有限公司抗-PD-1抗体、其生产方法及其使用方法RU20161284872016-07-1310BiSSAP1.3.619PRT智人（Homosapiens）合成的1PheThrPheSerSerTyrTrpMetTyr15217PRT智人（Homosapiens）合成的2AlaIleAspThrGlyGlyGlyArgThrTyrTyrAlaAspSerValLys151015Gly323PRT智人（Homosapiens）合成的3CysAlaArgAspGluGlyGlyGlyThrGlyTrpGlyValLeuLysAsp151015TrpProTyrGlyLeuAspAla20411PRT智人（Homosapiens）合成的4GlyGlyAsnAsnIleGlySerLysAsnValHis151057PRT智人（Homosapiens）合成的5ArgAspSerAsnArgProSer15610PRT智人（Homosapiens）合成的6CysGlnValTrpAspSerSerThrAlaVal15107129PRT智人（Homosapiens）合成的7GlnValGlnLeuValGlnSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerTyr202530TrpMetTyrTrpValArgGlnValProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045SerAlaIleAspThrGlyGlyGlyArgThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgValAsnAlaLysAsnThrMetTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgAspGluGlyGlyGlyThrGlyTrpGlyValLeuLysAspTrp100105110ProTyrGlyLeuAspAlaTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSer115120125Ser8107PRT智人（Homosapiens）合成的8GlnProValLeuThrGlnProLeuSerValSerValAlaLeuGlyGln151015ThrAlaArgIleThrCysGlyGlyAsnAsnIleGlySerLysAsnVal202530HisTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProValLeuValIleTyr354045ArgAspSerAsnArgProSerGlyIleProGluArgPheSerGlySer505560AsnSerGlyAsnThrAlaThrLeuThrIleSerArgAlaGlnAlaGly65707580AspGluAlaAspTyrTyrCysGlnValTrpAspSerSerThrAlaVal859095PheGlyThrGlyThrLysLeuThrValLeuGln1001059459PRT智人（Homosapiens）合成的9GlnValGlnLeuValGlnSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerTyr202530TrpMetTyrTrpValArgGlnValProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045SerAlaIleAspThrGlyGlyGlyArgThrTyrTyrAlaAspSerVal505560LysGlyArgPheAlaIleSerArgValAsnAlaLysAsnThrMetTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgAspGluGlyGlyGlyThrGlyTrpGlyValLeuLysAspTrp100105110ProTyrGlyLeuAspAlaTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSer115120125SerAlaSerThrLysGlyProSerValPheProLeuAlaProSerSer130135140LysSerThrSerGlyGlyThrAlaAlaLeuGlyCysLeuValLysAsp145150155160TyrPheProGluProValThrValSerTrpAsnSerGlyAlaLeuThr165170175SerGlyValHisThrPheProAlaValLeuGlnSerSerGlyLeuTyr180185190SerLeuSerSerValValThrValProSerSerSerLeuGlyThrGln195200205ThrTyrIleCysAsnValAsnHisLysProSerAsnThrLysValAsp210215220LysArgValGluProLysSerCysAspLysThrHisThrCysProPro225230235240CysProAlaProGluAlaAlaGlyGlyProSerValPheLeuPhePro245250255ProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThr260265270CysValValValAspValSerHisGluAspProGluValLysPheAsn275280285TrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArg290295300GluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgValValSerValLeuThrVal305310315320LeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSer325330335AsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLysThrIleSerLysTyrThr340345350LeuProProSerArgGluGluMetAlaLysGlyGlnProArgGluPro355360365GlnValThrLysAsnGlnValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPhe370375380TyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGlu385390395400AsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhe405410415PheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGly420425430AsnValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyr435440445ThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGlyLys45045510214PRT智人（Homosapiens）合成的10GlnProValLeuThrGlnProLeuSerValSerValAlaLeuGlyGln151015ThrAlaArgIleThrCysGlyGlyAsnAsnIleGlySerLysAsnVal202530HisTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProValLeuValIleTyr354045ArgAspSerAsnArgProSerGlyIleProGluArgPheSerGlySer505560AsnSerGlyAsnThrAlaThrLeuThrIleSerArgAlaGlnAlaGly65707580AspGluAlaAspTyrTyrCysGlnValTrpAspSerSerThrAlaVal859095PheGlyThrGlyThrLysLeuThrValLeuGlnArgThrValAlaAla100105110ProSerValPheIlePheProProSerAspGluGlnLeuLysSerGly115120125ThrAlaSerValValCysLeuLeuAsnAsnPheTyrProArgGluAla130135140LysValGlnTrpLysValAspAsnAlaLeuGlnSerGlyAsnSerGln145150155160GluSerValThrGluGlnAspSerLysAspSerThrTyrSerLeuSer165170175SerThrLeuThrLeuSerLysAlaAspTyrGluLysHisLysValTyr180185190AlaCysGluValThrHisGlnGlyLeuSerSerProValThrLysSer195200205PheAsnArgGlyGluCys210

权利要求：1.一种抗体或其抗原结合片段，其具有与人PD-1受体结合的能力，包括与SEQIDNO:3至少75％同一性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，结合区包括SEQIDNO:3的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：-与SEQIDNO:7至少75％同一性的重链可变区的序列，和-与SEQIDNO:8至少75％同一性的轻链可变区的序列。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述结合区包括SEQIDNO:1-3的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述结合区竞争结合或者结合至与包括SEQIDNO:7的氨基酸序列的所述结合区相同的表位。6.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述结合区与SEQIDNO:7至少90％同一性。7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述结合区包括SEQIDNO:7的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述结合区是人源化的。9.根据权利要求1-8的任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段涉及以下人同种型之一：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。10.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其结合至人PD-1，并且具有与SEQIDNO:9至少90％同一性的重链序列。11.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其结合至人PD-1，并且具有与SEQIDNO:10至少90％同一性的轻链序列。12.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中Fc恒定部分包括与天然序列相比减少或者消除任意效应子功能ADCC、ADCP或者CDC的任何突变。13.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中Fc恒定部分包括提高动物或者人药物动力学参数，比如t12β小时或者Cmaxμgml的突变。14.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，具有以下性质的至少一种：a聚集稳定性：在浓度为10mgml以上以及储存温度T＝4℃的溶液中经过6个月以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；b聚集稳定性:在浓度为10mgml以上以及温度升高至37℃的溶液中经过2周以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；c聚集稳定性:在浓度为10mgml以上以及温度升高至50℃的溶液中经过6个小时以上，聚集体含量的增加不超过最初含量的5％；d当结合至人PD-1时，解离常数KD不大于10-9M；e当结合至人PD-1时，动力学缔合常数kon1Ms为至少1051Ms；f当结合至人PD-1时，动力学解离常数dis1s为不大于10-41s。15.一种双特异性抗体，包括：根据权利要求1或者根据权利要求1的从属权利要求的任一项所述的抗体的抗原结合片段。16.一种分离的核酸分子，编码根据权利要求1-14的任一项所述的抗体或其抗原结合片段。17.一种表达载体，包括根据权利要求16所述的任一种分离的核酸分子。18.一种宿主细胞，包括根据权利要求16所述的核苷酸的序列。19.一种用于生产根据权利要求18所述的宿主细胞的方法，包括利用根据权利要求17所述的表达载体转染合适的干细胞。20.一种用于制备根据权利要求1-14的任一项所述的抗体的方法，包括：生产根据权利要求18所述的宿主细胞，在足以生产所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞，以及分离和纯化所获得的抗体或其活性片段。21.一种药物组合物，包括根据权利要求1-15的任一项所述的抗体或其抗原结合片段，并与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或者载体组合。22.根据权利要求21所述的药物组合物，用于治疗肿瘤和传染性疾病。23.一种对需抑制PD-1生物活性的对象的抑制PD-1的生物活性的方法，包括施用有效量的根据权利要求1-14的任一项所述的抗体。24.一种对亟需治疗的患者的治疗方法，包括施用根据权利要求1-14的任一项所述的任何抗体或者其抗原结合片段或者根据权利要求21或者22所述的药物组合物。

百度查询： “比奥卡特”封闭式股份公司 抗-PD-1抗体、其生产方法及其使用方法

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