申请/专利权人：陕西理工大学

申请日：2024-01-17

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN118027184A

主分类号：C07K16/10

分类号：C07K16/10;C07K1/22;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.05.14#公开

摘要：本发明具体涉及一种利用磁珠偶联人支原体跨膜蛋白M亲和纯化IgY的方法，包括以下步骤：1、人支原体跨膜蛋白M（蛋白M）与N‑羟基丁二酰亚胺（NHS）基团修饰的磁珠偶连；2、IgY抗体粗提物通过已偶联蛋白M的磁珠进行亲和纯化；3、将纯化所得IgY抗体溶液在磷酸盐（PBS）溶液中0～4℃过夜透析，收集透析袋内液体即为高纯度的IgY抗体。本发明具有以下有益效果：1、工序简单；2、重复度高；3、IgY提取效率较高，纯度可达90%。

主权项：1.蛋白M与N-羟基丁二酰亚胺（NHS）基团修饰的磁珠偶联的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备可溶性蛋白M；（2）取0.5～1.0mL20%磁珠至1.5mLEP管中，将其置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液，所述磁珠上偶联有NHS；（3）取0.5～1.0mLHCl（10～50mM）至步骤（2）弃上清液后含磁珠的EP管中，活化NHS基团，振荡或涡旋15～30s，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液；（4）取0.5～1.0mLNaHCO3（0.1～0.2MpH=8.0～8.5）至步骤（3）弃上清液后含磁珠的EP管中，中和磁珠的pH值，振荡或涡旋15～30s，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液；（5）取0.5～1.0mL步骤（1）制备的蛋白M溶液（4mgmL）至步骤（4）弃上清液后含磁珠的EP管中，振荡或涡旋15～30s，混合均匀；（6）将步骤（5）所得含磁珠的EP管置于旋转混合仪上，以10～80rmin室温混合2～3h，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，保存流穿液；（7）取0.5～1.0mL磁珠封闭液（100mMTris-HCl，150mMNaCl，pH=8.0～9.0）至步骤（6）所得含磁珠的EP管置于旋转混合仪上，以10～80rmin室温混合1～2h，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液；（8）取0.5～1.0mL超纯水至步骤（7）弃上清液后的含磁珠的EP管中，振荡或涡旋15～30s，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液；（9）取0.5～1.0mL含0.05%NaN3的PBS缓冲液（0.01～0.02M，pH=7.0～8.0）至步骤（8）弃上清液后含磁珠的EP管中，振荡或涡旋15～30s，将EP管置于磁性分离架内，富集磁珠，弃上清液，重复三次，磁珠置于0～4℃保存，即得到偶联上蛋白M的磁珠。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 陕西理工大学 一种利用磁珠偶联人支原体跨膜蛋白M亲和纯化IgY的方法

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