申请/专利权人：中国热带农业科学院三亚研究院

申请日：2023-10-19

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN117089632B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.14#授权;2023.12.08#实质审查的生效;2023.11.21#公开

摘要：本发明提供一种基于CRISPRCas12a‑RPA快速检测草地贪夜蛾的序列组合及其应用，属于生物检测技术领域，一种基于CRISPRCas12a‑RPA快速检测草地贪夜蛾的序列组合包括检测草地贪夜蛾的RPA引物对和特异性crRNA序列，以及利用该序列组合制成的试剂盒和利用该试剂盒在检测田间草地贪夜蛾的检测方法。本发明的检测方法将RPA扩增方法与CRISPRCas12a的检测方法相结合来检测草地贪夜蛾，通过蓝光切胶仪和侧流层析试纸条实现了可视化检测；本发明的检测方法简单快速，具有良好的特异性和敏感性，只需要简单的恒温加热便可以进行检测，具有在现场和田间快速对草地贪夜蛾核酸进行检测的优势。

主权项：1.一种基于CRISPRCas12a-RPA快速检测草地贪夜蛾的序列组合，其特征在于，包括根据COI基因设计的RPA引物对序列和crRNA序列；RPA引物对序列为：正向引物RPA-COI-F1的序列如SEQIDNO：1所示；反向引物RPA-COI-R2的序列如SEQIDNO：2所示；crRNA序列如SEQIDNO：3所示；所述序列组合还包括ssDNA探针序列；所述ssDNA探针序列是用于荧光定量PCR仪器检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列、用于可视化荧光检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列或用于侧流层析试纸条检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列；用于荧光定量PCR仪器检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM或ssDNA-reporter-CY5；其中，ssDNA-reporter-FAM为：5’-FAM-TTATT-BHQ1-3’；ssDNA-reporter-CY5为：5’-CY5-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；用于可视化荧光检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列为ssDNA-reporter-FAM-2，具体为：5’-FAM-TGTCTTATcccccATAAGACA-BHQ1-3’；用于侧流层析试纸条检测的草地贪夜蛾的ssDNA探针序列为FB-reporter，具体为：5’-FAM-TTTTTTTTT-Biotin-3’。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国热带农业科学院三亚研究院 一种基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测草地贪夜蛾的序列组合及其应用

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