申请/专利权人：吉林师范大学

申请日：2016-03-10

公开（公告）日：2017-06-06

公开（公告）号：CN105738556B

主分类号：G01N30/90(2006.01)I

分类号：G01N30/90(2006.01)I;G01N30/02(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2021.02.23#未缴年费专利权终止;2017.06.06#授权;2016.08.03#实质审查的生效;2016.07.06#公开

摘要：本发明公开了武力拔寒散的质量检测方法，该方法包括薄层色谱鉴别和武力拔寒散中橙皮苷的含量测定，所述薄层色谱法鉴别包括花椒和白花菜子的薄层色谱鉴别方法；所述橙皮苷的含量测定在色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A,以[冰醋酸：水（1:300）]为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为284nm；流速1.0mL·min‑1；检测器：紫外；柱温：30℃；进样量：5µL，将对照品溶液及供试品溶液注入液相色谱，按照上述条件测定，记录70min的色谱图，即得。本方法简单、快速、准确、重现性好，可为全面评价和控制武力拔寒散制剂提供质量依据。

主权项：武力拔寒散的检测方法，所述方法包括：薄层色谱鉴别和武力拔寒散中橙皮苷的含量测定；其中，所述薄层色谱鉴别，具体操作步骤如下：1花椒的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，收集乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取花椒对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷‑乙酸乙酯按体积配比9:1作为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；2白花菜子的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，弃去乙酸乙酯溶液，再用甲醇溶液50ml，加热回流提取2小时，作为供试品溶液；另取白花菜子对照药材1.9g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷‑乙酸乙酯按体积配比2:1作为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；所述武力拔寒散中橙皮苷的含量测定，具体操作步骤如下：1对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品6.29mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，得对照品溶液；2供试品溶液的制备：取武力拔寒散样品，混匀，精密称定1.122g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇100ml，超声处理30分钟，放冷，过滤，用30ml甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至10ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；3色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A,以冰醋酸：水按体积配比1:300作为流动相B，采用梯度洗脱方式：检测波长为284nm；流速1.0mL·min‑1；检测器：紫外；柱温：30℃；进样量：5μL；4测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱，测定，记录70min的色谱图，即得。

全文数据：武力拔寒散的检测方法技术领域[0001]本发明属于中成药技术领域中质量标准制定方法，具体涉及了一种中成药武力拔寒散中薄层色谱鉴别与含量测定的方法。背景技术[0002]武力拔寒散用于祛风散寒，活血通络。用于感受风寒，筋骨麻木，肩背酸痛，腰痛寒腿，饮食失调，胃寒作痛，肾寒精冷，子宫寒冷，行经腹痛，寒湿带下。武力拔寒散由白花菜子、花椒青椒去目）二味药经提取加工制成的制剂。武力拔寒散的处方工艺为：白花菜子600g、花椒青椒去目）500g，将以上二味药材粉碎成粗粉，过筛，混匀，每袋规格为17g，即得。该制剂收录于中国卫生部药品标准中药成方制剂第九册第90页，标准编号为WS3-B-1751-94〇[0003]中成药制备强调的是各味药的完整性，药材的优良性，按工艺处方制备。对制剂质量标准的研究，能对该制剂进行工艺评价、效果评价、组份的药材进行质量评价。武力拔寒散现有质量标准中仅有性状鉴别与显微鉴别，为了更好的控制与评价该制剂，需要对该质量标准进行进一步的研究，建立一种快速、准确的检测方法，使其能够更好地对该产品进行质量监控，提高用药安全。发明内容[0004]为解决上述技术问题，本发明提供了一种武力拔寒散的质量检测方法，所述方法包括:薄层色谱鉴别和武力拔寒散中橙皮苷的含量测定;其中，所述薄层色谱鉴别，具体操作步骤如下：[0005]1花椒的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，收集乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取花椒对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。（2白花菜子的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，弃去乙酸乙酯溶液，再用甲醇溶液50ml，加热回流提取2小时，作为供试品溶液。另取白花菜子对照药材1.9g，同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（2:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。[0006]所述武力拔寒散中橙皮苷的含量测定，具体操作步骤如下：[0007]1对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品6.29mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，得对照品溶液。[0008]2供试品溶液的制备:取武力拔寒散样品，混匀，精密称定1.122g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇IOOml，超声处理30分钟，放冷，过滤，用30ml甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至l〇ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。[0009]⑶色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以[冰醋酸:水1:300]为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱;检测波长为284nm;流速I.OmL·mirT1;检测器:紫外;柱温:30°C;进样量:5yL。[0011]4测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ1，注入液相色谱，测定，记录70min的色谱图，即得。[0012]本发明的优点和有益效果为：[0013]1本发明所述方法可全面评价和控制武力拔寒散质量，对原标准进行有效补充，在此色谱条件下测定橙皮苷的含量时，橙皮苷与相邻杂质峰分离良好，分离度大于1.5,能够为武力拔寒散处方中药材的质量控制提供科学依据。[0014]2本发明采用的薄层色谱法和高效液相色谱法，可定性鉴别武力拔寒散处方中白花菜子、花椒（青椒去目），定量测定武力拔寒散处方中花椒青椒去目）药材中橙皮苷C28H34O15的含量，该方法操作易行，定性测定专属性强、定量测定橙皮苷分离效果好，精密度、重现性高，稳定性良好。附图说明[0015]图1花椒薄层色谱图。[0016]图2白花菜子薄层色谱图。[0017]图3橙皮苷线性回归方程。[0018]图4橙皮苷对照品高效液相色谱图。[0019]图5批号为3101029样品高效液相色谱图。[0020]图6阴性样品高效液相色谱图。[0021]图7甲醇溶剂高效液相色谱图。具体实施方式[0022]以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。[0023]实施例[0024]1、仪器与试药[0025]1.1仪器:Agilentl260型高效液相色谱仪安捷伦科技有限公司）；2001B型系列超纯水器北京普析通用仪器有限责任公司）；电子天平BT125D型万分之一分析天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造）；SK5200H超声波清洗器300W60Hz上海科导仪器有限公司）；索氏提取器SXT-06上海洪纪仪器设备有限公司）。[0026]1.2试药与试剂:花椒对照药材批号：121106-201305;来源：中国食品药品检定研究院）；白花菜子对照药材来源:河北安国药材市场）；橙皮苷对照品（批号110712-201316;含量为95.38%;来源：中国食品药品检定研究院）；武力拔寒散北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号=3101029。两批按处方工艺自制武力拔寒散的处方工艺为：白花菜子600g、花椒（青椒去目）500g，将以上二味药材粉碎成粗粉，过筛，混匀），批号规定为20151107、20151209;白花菜子、花椒青椒均为市售（白花菜子按照《山东省中药材标准2002年版》检定合格;花椒青椒按照《中华人民共和国药典2015年版一部》检定合格）；甲醇为色谱纯；正己烷、乙酸乙酯为分析纯；水为超纯水；硅胶G薄层色谱预制板（规格：20Xl〇cm，涂层厚度0.2mm±0.03m;来源:烟台市化学工业研究所，批号：20150825;色谱柱为inertsil0DS-35ym4.6X250mmCN5020-01132。[0027]2、方法与结果：[0028]2.1薄层色谱法[0029]1花椒的薄层色谱鉴别方法:取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，收集乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取花椒对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。再取白花菜子1.9g作为阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典2015年版四部通则0502试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，且斑点清晰，阴性对照无干扰，结果见图1。其中，图1供试品1为批号3101029的武力拔寒散；供试品2为批号20151107的武力拔寒散；供试品3为批号20151209的武力拔寒散。[0030]2白花菜子的薄层色谱鉴别方法：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，弃去乙酸乙酯溶液，再用甲醇溶液50ml，加热回流提取2小时，作为供试品溶液。另取白花菜子对照药材1.9g，同法制备对照药材溶液。再取花椒1.5g作为阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典2015年版四部通则0502试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯2:1为展开剂，展开，取出，瞭干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，且斑点清晰，阴性对照无干扰，结果见图2。其中，图2供试品1为批号3101029的武力拔寒散;供试品2为批号20151107的武力拔寒散；供试品3为批号20151209的武力拔寒散。[0031]2.2高效液相色谱法测定武力拔寒散中橙皮苷的含量[0032]1对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品6.29mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，即得。[0033]2供试品溶液的制备:取武力拔寒散样品，混匀，精密称定1.122g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇IOOml，超声处理30分钟，放冷，过滤，用30ml甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至l〇ml，摇勾，滤过，取续滤液，即得。[0034]3阴性样品溶液的制备：取按照武力拔寒散处方工艺，去除花椒去目）药材，白花菜子粉碎成粗粉，过筛，混匀，精密称定0.605g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇IOOml，超声处理30分钟，放冷，过滤，用30ml甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至l〇ml，摇勾，滤过，取续滤液，即得。[0035]⑷色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以[冰醋酸:水1:300]为流动相B，按表1中规定进行梯度洗脱;检测波长为284nm;流速I.OmL·rniiT1;检测器:紫外;柱温:30°C;进样量:5yL。[0036]表1梯度洗脱表[0038]5测定:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液各5μ1，注入液相色谱，测定，记录70min的色谱图，即得。[0039]3、方法学考查[0040]线性关系：精密称定橙皮苷对照品6.24mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀。精密吸取溶液0.1、3、5、7、IOmL置IOml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀。注入液相色谱仪，按照上述色谱条件对样品进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，峰面积对浓度作线性回归方程。得回归方程，结果见表2。[0041]表2线性关系方程[0043]上述结果表明，橙皮苷在1.1903〜119.03ygmL范围内具有良好的线性关系，见图3〇[0044]精密度试验:取橙皮苷对照品溶液浓度为119.03ygmL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定其峰面积，RSD为0.14%n=6，结果表明仪器精密度良好。结果见表3。[0045]表3精密度试验结果[0047]稳定性试验:取批号为3101029的供试品1.0758g，按照供试品制备方法制成供试品溶液，按照上述色谱条件分别做3、6、9、12、15h的色谱图，测定其稳定性，橙皮苷的峰面积的RSD为0.76%，由实验数据说明样品溶液在15h内基本稳定，该方法稳定性良好，结果见表4〇[0048]表4稳定性试验结果[0050]重复性试验：取批号为3101029的供试品6份，按照含量测定样品溶液的配制方法制备溶液，并依照上述色谱条件测定，结果橙皮苷的RSD为1.0%。表明方法重复性良好，结果见表5。[0051]表5重复性试验结果[0053]回收率试验:精密称取已知含量的供试品6份批号为3101029,取样量按约含橙皮苷0.4mg，分别依次精密加入用甲醇配置成浓度0.12mgml橙皮苷对照品3ml、3ml、5ml、5ml、IOml、IOml，按供试品制备方法制备，测定方法同供试品测定方法操作，计算其加标回收率，结果见表6。[0054]表6回收率试验结果[0056]上述结果表明，6份橙皮苷的总回收率为96.91%，RSD值为1.29%，该方法准确率尚。[0057]4、样品含量测定[0058]按上述色谱条件测定三批供试品溶液，结果每克武力拔寒散中含橙皮苷见表7。[0059]表7样品含量测定结果[0061]综上，本发明所建立的薄层色谱鉴别，专属性强;高效液相色谱法测定武力拔寒散中橙皮苷含量，具有精密度好、重复性高的特点，可全面、更有效地控制该药的质量。

权利要求：1.武力拔寒散的检测方法，所述方法包括:薄层色谱鉴别和武力拔寒散中橙皮苷的含量测定;其中，所述薄层色谱鉴别，具体操作步骤如下：1花椒的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，收集乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液;另取花椒对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯按体积配比9:1作为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；2白花菜子的薄层色谱鉴别：取本品3.5g，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50ml，加热回流提取3小时，弃去乙酸乙酯溶液，再用甲醇溶液50ml，加热回流提取2小时，作为供试品溶液；另取白花菜子对照药材1.9g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各如1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯按体积配比2:1作为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；所述武力拔寒散中橙皮苷的含量测定，具体操作步骤如下：1对照品溶液的制备:精密称取橙皮苷对照品6.29mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，得对照品溶液；2供试品溶液的制备:取武力拔寒散样品，混匀，精密称定1.122g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇l〇〇ml，超声处理30分钟，放冷，过滤，用30ml甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至l〇ml，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；3色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以冰醋酸:水按体积配比1:300作为流动相B，采用梯度洗脱方式：检测波长为284nm;流速1.OmL•min—1;检测器:紫外;柱温:30°C;进样量:5yL;4测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5iU，注入液相色谱，测定，记录70min的色谱图，即得。

百度查询： 吉林师范大学 武力拔寒散的检测方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD