申请/专利权人：佛兰芒技术研究所有限公司

申请日：2017-11-29

公开（公告）日：2019-08-23

公开（公告）号：CN110168073A

主分类号：C12N1/20(20060101)

分类号：C12N1/20(20060101);B09C1/10(20060101);C02F3/34(20060101);C12R1/01(20060101);C12R1/32(20060101)

优先权：["20161129 EP 16201076.3"]

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2019.12.06#实质审查的生效;2019.08.23#公开

摘要：本发明提供了使用细菌聚生体降解MTBE、TBA和或HCHO的工具和方法，所述细菌聚生体包含选自甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6的一种或多种菌株。

主权项：1.一种分离的细菌聚生体，所述分离的细菌聚生体包含保藏为LMGP-27480并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:1的甲基养菌属菌株LD3，所述分离的细菌聚生体是降解甲基叔丁基醚MTBE的聚生体。

全文数据：用于降解MTBE、TBA和或HCHO的细菌菌株和包含所述细菌菌株的细菌聚生体技术领域本发明涉及用于在降解甲基叔丁基醚MTBE、叔丁醇TBA和或甲醛HCHO中使用的细菌聚生体及其应用。背景技术受甲基叔丁基醚MTBE污染的地下水是一个长期且全球性的环境问题。MTBE是合成汽车燃料添加剂，并且主要用作四乙基铅的替代，以提高无铅汽油的辛烷值。汽油中使用MTBE的另一个优点是改善了驱动含氧汽油的汽车的废气质量。然而，MTBE在汽油中的存在导致地下水被MTBE污染，这主要归因于地下油储气罐泄漏。由于MTBE在地下水中具有高溶解度，因此地下水中的MTBE浓度可能相对较高。叔丁基醇TBA也称为叔丁醇或第三丁基醇，是MTBE降解中的中间体和BTEX化合物苯、甲苯、乙苯和二甲苯经常发现与MTBE污染相关。地下水中MTBE的存在对饮用水供应构成了威胁，这归因于MTBE在地球的地表下的高流动性、其顽固性以及MTBE在水中的低味道和气味阈值。MTBE水平超过国家阈值浓度的大量污染羽流表明需要有效的修复技术。为了处理受MTBE污染的地下水，生物修复被认为是物理方法的有价值的替代方法，物理方法对于处理MTBE和TBA污染是低效的。迄今为止，已知有限数量的纯培养物purecultures或纯性培养物axeniccultures和混合培养物具有使用MTBE和或TBA作为唯一碳源和能源来源的能力。对于大多数混合培养物，尽管已经做出努力，但组成是未知的，并且尚未鉴定出导致MTBE和或TBA降解的细菌。与许多其他污染的降解一样，MTBE的生物降解受到若干困难的挑战。大多数纯培养物在MTBE上生长非常缓慢，一些细菌很容易失去降解MTBE的能力，并且一些菌株需要添加特定的生长添加剂。Moreels等人2004；FEMSMicrobiologyEcology491:121-128比较了来自受污染和未受污染的土壤和含水层的样品对MTBE进行生物降解的能力。Bastiaans等人2013；Proc.Aquarehab,Sec.Eur.Symp.第70-75页和Debor等人2010,KULeuven论文指出一种细菌M-聚生体，据称它适用于在地下水污染物的生物降解中使用。然而，M-聚生体没有以有条件完成的方式公开，并且不能基于这种教导再现。发明内容本发明提供了包含降解MTBE、TBA和或HCHO的纯性培养物的聚生体，使用它们的方法和鉴定它们的工具。本文所述的聚生体具有优异的降解MTBE、TBA和或HCHO的能力，并且已成功用于MTBE去污。更具体地，本发明的聚生体能够降解以低浓度或高浓度存在的MTBE，因为MTBE的限制或过量不限制聚生体生长和降解MTBE、TBA和或HCHO的能力。本文所述的聚生体即使在低营养素浓度下也具有相对高的MTBE和TBA降解速率，并且可以在宽范围的边界条件如低温下应用。此外，当使用本发明的聚生体时，生物降解在没有中间体的积累的情况下完成。与先前所述的聚生体相反，本发明的聚生体非常稳定并且即使在亚培养若干年或当转移至不同环境条件时也保持其MTBE降解能力。在第一方面，本申请提供了包含甲基养菌属Methylibium菌株LD3的分离的细菌聚生体，所述甲基养菌属菌株LD3是降解甲基叔丁基醚MTBE的菌株。细菌菌株甲基养菌LD3已经保藏为LMGP-27480，并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:1。已经发现，包含甲基养菌属菌株LD3的聚生体在降解MTBE及其分解产物TBA、HIBA和甲醛方面非常有效。进一步发现，包含甲基养菌属菌株LD3与特定其他菌株组合的聚生体具有进一步改善的MTBE降解效率。因此，在具体实施例中，本文所述的聚生体进一步包含噬氢菌属Hydrogenophaga菌株噬氢菌LD1和或分枝杆菌属Mycobacterium菌株分枝杆菌LD6。噬氢菌属菌株噬氢菌LD1已经保藏为LMGP-27479，并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:2。分枝杆菌属菌株分枝杆菌LD6被保藏为LMGP-27498，并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:3。在具体实施例中，本文所述的聚生体包含甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和分枝杆菌LD6，并且对应于保藏为LMGP-27478和LMG27909的聚生体M-聚生体。在本发明的聚生体的另外的具体实施例中，甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和分枝杆菌LD6分别以1％-60％之间、40％-99％之间和0.005％-10％之间的比率存在，更具体地分别以1％-55％之间、45％-99％之间和0.005％-2％之间的比率存在。在本发明的聚生体的具体实施例中，甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和分枝杆菌LD6分别以102至108个细胞ml之间如104-108个拷贝ml甲基养菌LD3、106-109个拷贝ml噬氢菌LD1、以及102-106个拷贝ml分枝杆菌LD6存在。在本发明的聚生体的具体实施例中，甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和分枝杆菌LD6以约％％％1-5545-990.005-2的相对丰度存在，如以4.595.50.03、51.348.70.005、47.652.40.008、2.197.90.006、7.392.60.02、36.363.60.07、1.398.40.3或13.9860.02的相对丰度存在。在具体实施例中，如通过q-PCR所确定，在MTBE降解期间和之后，如在载体材料上所测量的甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6的相对浓度分别为0.01％-99.98％、0.01％-99,98％和0.01％-34％。在具体实施例中，在用实际地下水的非灭菌条件下降解MTBE期间和之后，如在载体材料上测量的聚生体中甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6的相对浓度分别为0.1％-86％、0.1％-10％、120mgLMTBETBA和80mgLBTEX的初始浓度降解MTBE、TBA、HIBA和BTEX，并且能够将MTBE、TBA和BTEX降解至浓度低于气相色谱-质谱GC-MS的检测限即2μgLMTBE，65μgLTBA和0.5μgLBTEX，伴随相关的生物质产生。MTBE降解速率的计算也在本申请公开的实例中举例说明。根据另一方面，本申请提供了用于降解受甲基叔丁基醚MTBE、叔丁基醇TBA和或甲醛HCHO污染的介质中的MTBE、TBA和或HCHO的方法。在具体实施例中，用于降解MTBE更具体是MTBE、TBA和或HCHO的方法包括用本文所述的分离的微生物和或聚生体处理受污染的介质的步骤。如本文所设想的，处理可以非原位发生或原位发生。在具体实施例中，介质是地下水。设想了将污染介质与本文所述的分离的细菌和或聚生体接触的不同实践方式。例如，地下水中MTBE的生物降解可以通过在接种了一种或多种微生物和或聚生体的生物反应器中泵送和处理地下水来进行，或者通过将一种或多种微生物和或聚生体添加至地表下的受污染的介质中来进行。通常，本领域的技术人员已知的各种生物反应器可以用于本发明的方法中。可以使用悬浮生长反应器，如膜反应器、标准连续搅拌釜反应器和活性淤泥系统activatedsludgesystems。可替代地，如果需要，也可以使用固定膜反应器，如流化床反应器或固定支座反应器。可替代地，或互补的，细菌可限制在生物屏障、生物过滤器和或生物堆中。本领域的技术人员通常使用此类生物屏障、生物过滤器和生物堆来防止污染扩散，例如当布置于污染源和所述污染下游的地下水之间时。迄今为止，只有极少数研究描述了处理受MTBE污染的地下水的生物反应器的发展。将本发明的分离的微生物和或细菌聚生体用于本发明的方法，以降解受甲基叔丁基醚MTBE、叔丁基醇TBA和或甲醛HCHO污染的介质中的MTBE、TBA和或HCHO。术语“降解”意味着与初始浓度相比，MTBE、TBA和或HCHO污染的最终浓度降低。在具体实施例中，在降解后，最终浓度达到或低于官方机构设定的监管限值。更优选地，一种或多种污染物的最终浓度不再可检测到。地下水中MTBE和TBA的浓度可能相对较高例如，据报道MTBE高达830mgL或更高，并且TBA高达78mg以上。然而，通常地下水浓度为约0.5-50mgL。包括比利时在内的若干个国家已对地下水中的MTBE采用了监管限值。已经将地下水的干预水平确定为300μgLMTBE比利时、200μgLMTBE德国和瑞士、以及9.4mgLMTBE荷兰。然而，清污水平clean-uplevel优选地更低。因此，根据具体实施例，本文所述的方法涉及MTBE的降解，以便降低至小于300μgL或更低，更具体是降低至200μgL或更低，最具体是降低至低于100μgL。在具体实施例中，本文所述的方法确保达到100μgLMTBE的清污水平。TBA是MTBE降解的稳定中间体，通常与MTBE污染相关，即浓度范围从4.10-4至78mgL变化。在比利时，建议地下水中的水平低于660μgL。BTEX化合物苯、甲苯、乙苯和二甲苯是受MTBE污染的地下水中熟知的共污染物。BTEX在汽油中以约18％vv存在，并且据报道在欧洲地下水中以0.2-147mgL的浓度存在。因此，在具体实施例中，本发明的方法确保TBA的降解以降低至小于700μgL。发明人发现本发明的微生物和或聚生体可以应用于在广泛的边界条件包括针对原位生物强化的典型边界条件低温和低溶解氧浓度以及针对非原位生物修复的生物反应器中存在的条件室温、中性pH、高溶解氧浓度和低营养素浓度下生物降解MTBE和TBA。发明人发现，当使用中试规模生物反应器泵送和处理受MTBE污染的具有MTBE5mgLMTBE的地下水时，1.6小时的最小水力停留时间足以将MTBE去除至低于地下水中100μgLMTBE的再入渗reinfiltration限值。已经证明，还可以有效地去除较低的MTBE浓度99％图11a。因此，在HRT为6.4h时获得0.01-0.03mgL的MTBE流出物浓度，其中流出物中的TBA浓度从低于0.065mgL的检测限至0.08mgL数据未显示。允许所有HRT的稳态条件至少持续3天，即在实施的HRT为6h时最小12个孔体积。从第53天开始，通过增加流入物和营养素流速，实施的HRT在59天的时间段内从6.4h逐渐降低至0.7h。在此期间，在HRT为6.4至1.6h时，MTBE流入物浓度在2mgL和5mgL之间变化被去除至流出物中低于0.1mgLMTBE的排放限值的浓度。在这些适应阶段期间，最大MTBE和TBA流出物浓度分别为0.4mgL和0.1mgL。在实施的HRT为1.6h时，到恢复MTBE的完全去除流出物浓度为0.043mgLMTBE仅需要3天的响应时间。在这些条件下，MTBE流出物浓度低至1μgL，并且记录到MTBE去除百分比高于99.98％。在HRT为0.6h时，流出物MTBE浓度增加至在2.3mgL至3.8mgL之间。然而，在此期间TBA流出物浓度仍低于检测限，其中一个峰值为0.14mgLTBA。因此，意味着总MTBE去除至低于MTBE排放限值的最小HRT为1.6h。意味着完全MTBE去除的最高记录MTBE去除速率为2.5mgMTBELh，是在实施的HRT为1.6h时在第104天测量的图11b。在MTBE浓度突然增加后，生物反应器迅速恢复，并且MTBE的去除被证明是纯生物的。实例9：在接种M-聚生体的中试生物反应器系统中处理受MTBETBA污染的地下水使用300L原型生物反应器图10中所示系统的升级评估接种M-聚生体的中试规模生物反应器的性能。它涉及上流式生物反应器，其中含有MTBETBA的水通过接种有M-聚生体的载体材料床从底部到顶部泵送。生物反应器作为主要含聚苯乙烯颗粒PSG，莎斯特公司Sarstedt，布雷希特Nümbrecht，德国的部分浮床系统进行操作。水再循环回路将部分水从反应器的顶部返回到底部以1改善生物反应器的均匀性和2向生物反应器供应氧。处理的水的出口位于反应器的顶部。除了添加氧外，还集成了连续营养素氮和磷剂量系统和pH校正系统，为细菌活动创造了更佳的条件。生物反应器集成在由以下构成的移动处理系统中：1除铁装置，2连接到流入物和流出物池的生物反应器，和3抛光活性炭过滤器。使用MTBE作为唯一碳源，在实验室中在介质WXP参见实例1上培养M-聚生体。将生物反应器系统离场加载4L的M-聚生体8.2108个细胞ml，假设一个16SRNA-基因拷贝细胞。在1个月的再循环模式操作期间证实了系统的反应性，并随后连续操作1个月水力停留时间＝10h，其中地下水被8mgLMTBE和4mgLTBA人工污染。观察到有效去除97％结果未显示。接下来，将中试规模接种的生物反应器300L运输到实际污染场地，以评估其在5个月测试期间在实际场地条件下的性能。测试场地是工业场地化学品储存，其中用作中试系统的流入物的泵送的地下水含有MTBE300-5000μgLMTBE以及3500-10000μgLTBA。图12显示了在中试系统的流入物和生物反应器的流出物中在GAC步骤之前TBA浓度随时间变化的评估。发现MTBE和TBA均被中试系统有效去除低于100μgL，所述中试系统在低流量50Lh，HRT＝6h下操作表2。MTBE浓度从高达4.500μgL的浓度降低至低于110μgL的浓度97％去除率。高达10.000μgL的TBA浓度降低至低于180μgL98％去除。包括在系统中作为抛光步骤的活性炭过滤器将流出物浓度进一步降低至低于100μgL，通常低于检测限。地下水中高浓度的溶解铁是仅在短时间内实施高流量100lh，HRT＝3h的原因。尽管在系统中应用了许多非理想但实际的情况pH波动、温度升高超过30℃、非操作期间、流量波动……，但是系统快速适应并且不需要重新接种就保持活性。表2：用M-聚生体进行中试生物反应器测试的操作数据基于图3至5中显示的16SrRNA基因序列，开发了特异性qPCR引物和FISH引物，并用于确定中试处理系统中甲基养菌属物种LD3、噬氢菌属物种LD1和分枝杆菌属物种LD6的丰度。基于FISH，来自M-聚生体的这三种分离菌占生物反应器的流出物中总细菌的25％。在来自生物反应器的淤泥中和在载体材料上，这分别平均为20％5个数据点和26％3个数据点。在除铁装置中，高达31％的总细菌可以与M-聚生体中的关键生物相关联。基于q-PCR分析，甲基养菌属物种LD3、噬氢菌属物种LD1和分枝杆菌属物种LD6的总和被定量为在生物反应器的流出物6个数据点中平均1.4104个细胞ml，来自生物反应器的淤泥4个数据点中平均9106个细胞g，载体材料2个数据点上平均3.5107个细胞g。在生物反应器中，在整个测试期间甲基养菌属菌株仍然是主要的，但是也发现了噬氢菌属物种和分枝杆菌属物种存在于不同取样时间内表3。表3：在用M-聚生体接种的中试生物反应器系统中的甲基养菌属物种LD3、噬氢菌属物种LD1和分枝杆菌属物种LD6的如通过q-PCR确定的绝对丰度。序列表佛兰芒技术研究所有限公司（VITONV）用于降解MTBE、TBA和或HCHO的细菌菌株和包含所述细菌菌株的细菌聚生体3SIPOSequenceListing1.011661DNA甲基养菌属物种Methylibiumsp.1tgaattgtaatacgactcactatagggcgaattgggccctctagatgcatgctcgagcgg60ccgccagtgtgatggatatctgcagaattcgcccttagagtttgatcctggctcagattg120aacgctggcggcatgccttacacatgcaagtcgaacggcagcacgggagcaatcctggtg180gcgagtggcgaacgggtgagtaatacatcggaacgtgcccagttgtgggggatagcccgg240cgaaagccggattaataccgcatacgacctacgggtgaaagcgggggatcgcaagacctc300gcgctattggagcggccgatgtcggattagctagttggtggggtaaaagcctaccaaggc360tacgatccgtagctggtctgagaggacgaccagccacactgggactgagacacggcccag420actcctacgggaggcagcagtggggaattttggacaatgggcgcaagcctgatccagcca480tgccgcgtgcgggaagaaggccttcgggttgtaaaccgcttttgtcagggaagaaacggt540ttgggctaataccccgaactaatgacggtacctgaagaataagcaccggctaactacgtg600ccagcagccgcggtaatacgtagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcg660tgcgcaggcggctttgcaagacagatgtgaaatccccgggctcaacctgggaactgcatt720tgtgactgcaaggctggagtgcggcagagggggatggaattccgcgtgtagcagtgaaat780gcgtagatatgcggaggaacaccgatggcgaaggcaatcccctgggcctgcactgacgct840catgcacgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccctaaac900gatgtcaactggttgttggacggcttgctgttcagtaacgaagctaacgcgtgaagttga960ccgcctggggagtacggccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacggggacccgcacaa1020gcggtggatgatgtggtttaattcgatgcaacgcgaaaaaccttacctacccttgacatg1080tctagaagttaccagagatggtttcgtgctcgaaagagaactagaacacaggtgctgcat1140ggccgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaaccctt1200gtcattagttgctacgtaagggcactctaatgagactgccggtgacaaaccggaggaagg1260tggggatgacgtcaggtcatcatggcccttatgggtagggctacacacgtcatacaatgg1320ccggtacagagggctgccaacccgcgagggggagccaatcccagaaaaccggtcgtagtc1380cggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagc1440ttgccgcggtgaatacgttcctgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagcgg1500gttctgccagaagtagttagcctaaccgcaaggagggcgattaccacggcagggttcgtg1560actggggtgaagtcgtaacaaggtaaccaagggcgaattccagcacactggcggccgtta1620ctagtggatccgagctcggtaccaagcttggcgtaatcatg166121665DNA噬氢菌属物种Hydrogenophagasp.2catgattacgccaagcttggtaccgagctcggatccactagtaacggccgccagtgtgct60ggaattcgcccttagagtttgatcctggctcagattgaacgctggcggcatgctttacac120atgcaagtcgaacggtaacaggccgcaaggtgctgacgagtggcgaacgggtgagtaatg180catcggaacgtgcccagtcgtgggggataacgcagcgaaagctgtgctaataccgcatac240gatctatggatgaaagcgggggaccgtaaggcctcgcgcgattggagcggccgatgtcag300attagctagttggtggggtaaaggcccaccaaggcgacgatctgtagctggtctgagagg360acgaccagccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtgggg420aattttggacaatgggcgcaagcctgatccagcaatgccgcgtgcaggaagaaggccttc480gggttgtaaactgcttttgtacggaacgaaacggtctgggttaatacctcgggctaatga540cggtaccgtaagaataagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggg600tgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgtgcgcaggcggtgatgtaagacagt660cgtgaaatccccgggctcaacctgggaattgcgattgtgactgcatcgctggagtgcggc720agagggggatggaattccgcgtgtagcagtgaaatgcgtagatatgcggaggaacaccga780tggcgaaggcaatcccctgggcctgcactgacgctcatgcacgaaagcgtggggagcaaa840caggattagataccctggtagtccacgccctaaacgatgtcaactggttgttgggtctct900tctgactcagtaacgaagctaacgcgtgaagttgaccgcctggggagtacggccgcaagg960ttgaaactcaaaggaattgacggggacccgcacaagcggtggatgatgtggtttaattcg1020atgcaacgcgaaaaaccttacccacctttgacatgtacggaatttgccagagatggctta1080gtgctcgaaagagaaccgtaacacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgag1140atgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgtcattagttgctacattcagttgg1200gcactctaatgagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcctc1260atggcccttataggtggggctacacacgtcatacaatggccggtacaaagggtcgcaaac1320ccgcgagggggagccaatccatcaaagccggtcgtagtccggatcgcagtctgcaactcg1380actgcgtgaagtcggaatcgctagtaatcgtggatcagcatgtcacggtgaatacgttcc1440cgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagcgggtctcgccagaagtagttagc1500ctaaccgcaaggagggcgattaccacggcggggttcgtgactggggtgaagtcgtaacaa1560ggtagccgtaagggcgaattctgcagatatccatcacactggcggccgctcgagcatgca1620tctagagggcccaattcgccctatagtgagtcgtattacaattca166531652DNA分枝杆菌属物种Mycobacteriumsp.3tgaattgtaatacgactcactatagggcgaattgggccctctagatgcatgctcgagcgg60ccgccagtgtgatggatatctgcagaattcgcccttagagtttgatcctggctcaggacg120aacgctggcggcgtgcttaacacatgcaagtcgaacggaaaggcccttcggggtgctcga180gtggcgaacgggtgagtaacacgtgggtgatctgccctgcactttgggataagcctggga240aactgggtctaataccgaataggactccggactgcatggtctggggtggaaagcttttgc300ggtgtgggatgggcccgcggcctatcagcttgttggtggggtgatggcctaccaaggcga360cgacgggtagccggcctgagagggtgaccggccacactgggactgagatacggcccagac420tcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgcaagcctgatgcagcgacg480ccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcacagacgaagcgcaag540tgacggtatgtgcagaagaaggaccggccaactacgtgccagcagccgcggtaatacgta600gggtccgagcgttgtccggaattactgggcgtaaagagctcgtaggtggtttgtcgcgtt660gttcgtgaaaactcacagcttaactgtgggcgtgcgggcgatacgggcagactggagtac720tgcaggggagactggaattcctggtgtagcggtggtatgcgcagatatcaggaggaacac780cggtggcgaaggcgggtctctgggcagtaactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagc840gaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacggtgggtactaggtgtgggttt900ccttccttgggatccgtgccgtagctaacgcattaagtaccccgcctggggagtacggcc960gcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggagcatgtggatt1020aattcgatgcaacgcgaagaaccttacctgggtttgacatgcacaggacgccggcagaga1080tgtcggttcccttgtggcctgtgtgcaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtg1140agatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgtctcatgttgccagcacgttat1200ggtggggactcgtgagagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggatgacgtcaag1260tcatcatgccccttatgtccagggcttcacacatgctacaatggccggtacaaagggctg1320cgatgccgtgaggtggagcgaatcctttcaaagccggtctcagttcggatcggggtctgc1380aactcgaccccgtgaagtcggagtcgctagtaatcgcagatcagcaacgctgcggtgaat1440acgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcatgaaagtcggtaacacccgaagc1500cggtggcctaaccccttgtgggagggagccgtcgaaggtgggatcggcgattgggacgaa1560gtcgtaacaaggtagccgtaagggcgaattccagcacactggcggccgttactagtggat1620ccgagctcggtaccaagcttggcgtaatcatg1652

权利要求：1.一种分离的细菌聚生体，所述分离的细菌聚生体包含保藏为LMGP-27480并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:1的甲基养菌属菌株LD3，所述分离的细菌聚生体是降解甲基叔丁基醚MTBE的聚生体。2.根据权利要求1所述的细菌聚生体，所述细菌聚生体进一步包含保藏为LMGP-27479并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:2的噬氢菌属菌株噬氢菌LD1。3.根据权利要求1或2所述的细菌聚生体，所述细菌聚生体进一步包含保藏为LMGP-27498并且特征在于存在16SrRNA序列SEQIDNO:3的分枝杆菌属菌株分枝杆菌LD6。4.根据权利要求3所述的细菌聚生体，其中所述细菌聚生体中的甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6的相对浓度为约％％％1-6040-990.005-10，和或其中所述甲基养菌属菌株LD3以104-108个细胞ml之间的浓度存在、所述噬氢菌属菌株噬氢菌LD1以106-109个细胞ml之间的浓度存在，并且保藏的分枝杆菌属菌株分枝杆菌LD6以102-106个细胞ml之间的浓度存在。5.根据权利要求3或4所述的细菌聚生体，所述细菌聚生体包含所述甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6菌株，其中所述聚生体的MTBE降解速率为至少10mgMTBE克细胞干重小时。6.根据权利要求3至5中任一项所述的细菌聚生体，所述细菌聚生体已保藏为LMGP-27909。7.根据权利要求1至5中任一项所述的细菌聚生体降解受甲基叔丁基醚MTBE、叔丁醇TBA、甲醛HCHO和或BTEX污染的介质中的MTBE、TBA和或HCHO的用途。8.一种用于降解受甲基叔丁基醚MTBE、叔丁醇TBA和或甲醛HCHO污染的介质中的MTBE、TBA和或HCHO的方法，所述方法包括以下步骤：i提供根据权利要求1至5中任一项所述的聚生体；和ii用所述微生物、组合物或聚生体处理所述受污染的介质以降解至少一部分所述污染。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述处理在生物反应器中发生或通过将聚生体添加到受污染的介质中原位发生。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中以在104至109CFU之间的细胞计数添加聚生体。11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中所述聚生体中的甲基养菌LD3、噬氢菌LD1和或分枝杆菌LD6的相对浓度为约％％％1-6040-990.005-10。12.根据权利要求8至11中任一项所述的方法，所述方法进一步包括确定所述介质中MTBE、TBA和或HCHO的浓度和或确定所述介质中MTBE、TBA和或HCHO的降解速率。13.根据权利要求8至12中任一项所述的方法，其中所述受污染的介质选自由以下构成的组：受污染的土壤、受污染的淤泥、受污染的沉积物、受污染的疏浚尾料、受污染的化学废物、受污染的流体和受污染的水。14.一种用于检测样品中存在保藏为LMGP-27480的甲基养菌LD3微生物、保藏为LMGP-27479的噬氢菌LD1微生物和或保藏为LMGP-27498的分枝杆菌LD6微生物的方法，所述方法包括：任选地通过将所述样品与引物或探针接触，来鉴定所述样品中分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的序列的存在，所述引物或探针能够特异性杂交或扩增对SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3具有特异性的序列，以及确定存在杂交信号或扩增产物，所述杂交信号或扩增产物指示所述样品中存在保藏为LMGP-27480的甲基养菌LD3微生物、保藏为LMGP-27479的噬氢菌LD1微生物和或保藏为LMGP-27498的分枝杆菌LD6微生物。15.一种分离的降解甲基叔丁基醚MTBE的甲基养菌属菌株，所述甲基养菌属菌株的特征在于存在16SRNA序列SEQIDNO:1，并且是保藏为LMGP-27480的菌株甲基养菌LD3。

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