申请/专利权人：广西壮族自治区兽医研究所

申请日：2019-12-12

公开（公告）日：2020-04-03

公开（公告）号：CN110954626A

主分类号：G01N30/06(20060101)

分类号：G01N30/06(20060101);G01N30/74(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.01.20#发明专利申请公布后的驳回;2020.05.01#实质审查的生效;2020.04.03#公开

摘要：本发明涉及一种利用ABTS‑UPLC‑PAD法同时评价桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的抗氧化性和含量的方法，包括以下步骤：将与ABTS+反应前和ABTS+反应后样品溶液分别进行超高效液相色谱仪检测；根据UPLC测定得到的ABTS+反应前和ABTS+反应后样品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，计算没食子酸和鞣花酸清除率，再用UPLC测定不同浓度的没食子酸和鞣花酸对照品溶液，分别以没食子酸和鞣花酸对照品浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，作标准曲线，计算桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量。本发明能够同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量，分析速度快，灵敏度高，分离度好，操作简便，试剂消耗少。

主权项：1.一种利用ABTS-UPLC-PAD法同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，其特征在于，包括以下步骤：1对样品桃金娘根药材进行鉴定；2配制没食子酸对照品和鞣花酸对照品标准溶液；3配制ABTS+工作液：将浓度为7.4～37.0mmolL的ABTS溶液和浓度为2.6～13.0mmolL的K2S2O8溶液按照等体积比例混合后，室温避光反应12～16h，稀释，得ABTS+工作液；4配制桃金娘根样品溶液：准确称取0.1～5.0g桃金娘根粉末置于50～250mL具塞锥形瓶中，精密加入10～200mL甲醇，称定重量，在50～1500W、25～100kHz、25～60℃条件下超声提取10～120min，放冷，过滤，挥干，甲醇溶解残渣，并定容至25mL容量瓶中；5分别精密吸取1～5mL步骤4所得的样品溶液于两个离心管中，再分别加入与样品溶液等体积的超纯水和ABTS+工作液，摇匀，室温下避光反应5～60min，得到ABTS+反应前和ABTS+反应后样品溶液；6将与ABTS+反应前和ABTS+反应后的样品溶液分别进行超高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：2.1mm×100mm、1.7μmWatersBEHC18色谱柱；流动相：乙腈-0.1％甲酸；梯度洗脱条件：0～2min，6％乙腈；2～3min，6～16％乙腈；3～8min，16～20％乙腈；8～10min，6％乙腈；检测波长：210～400nm；流速：0.1～0.5mLmin；柱温：25～45℃；进样体积0.1～10μL；7成分含量及其抗氧化作用评价：记录UPLC测定得到的ABTS+反应前和ABTS+反应后样品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，依据下式计算清除率：清除率＝1-AA0，其中A0为ABTS+反应前化合物峰面积，A为ABTS+反应后化合物峰面积；再分别以没食子酸和鞣花酸对照品浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，作标准曲线，计算桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量。

全文数据：

权利要求：

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