申请/专利权人：江西师范大学

申请日：2015-12-04

公开（公告）日：2020-08-18

公开（公告）号：CN105624282B

主分类号：C12Q1/6895(20180101)

分类号：C12Q1/6895(20180101);C12N15/11(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.08.18#授权;2017.12.29#实质审查的生效;2016.06.01#公开

摘要：本发明公开了一种濒危羊踯躅多态性SSR分子标记开发与应用的方法，利用简化基因组测序技术开发得到11,687对羊踯躅SSR分子标记，从中鉴定获得了16对多态性SSR分子标记，它们能够检测到羊踯躅基因组的SSR位点信息，其有效等位基因数范围为3‑15个，杂合度He范围为0.489‑0.908。本发明提供一批可用于群体遗传学、系统发生学及保护生物学等研究的SSR引物，应用这些多态性SSR分子标记能评估分析濒危羊踯躅遗传多样性和遗传结构，为该物种的保护提供科学依据和参考。

主权项：1.一种濒危羊踯躅多态性SSR分子标记开发与应用的方法，其特征在于，（1）濒危羊踯躅SSR分子标记的获得：利用简化基因组测序技术对濒危羊踯躅基因组进行测序，经序列数据过滤、聚类和组装步骤，得到171.534Mb的基因组序列，包含498,252contigs，测序质量合格，GC分布正常，采用SSR搜索软件对contig序列进行SSR检测搜索，最后从11,961微卫星位点中开发得到11,687SSR分子标记；（2）SSR分子标记的筛选与合成：从11,687SSR分子标记中选取94对SSR进行遗传多样性的筛选鉴定，SSR分子标记初选的条件是2个碱基重复单元的SSR需要有10~15个拷贝的重复，3个碱基重复单元的SSR需要有6~12个拷贝的重复，开发设计好的SSR分子标记引物序列合成；（3）濒危羊踯躅多态性SSR的鉴定：采用不同地理分布的羊踯躅DNA对合成94对SSR引物进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，最后从94对SSR引物中获得16对的多态性SSR分子标记，见表1；（4）濒危羊踯躅多态性SSR分子标记的有效性评估：将筛选获得16对多态性SSR标记在2个羊踯躅自然居群，每个居群含21个个体，进行PCR扩增，评估分析了这16对多态性SSR标记能够用于羊踯躅的遗传多样性分析和保护生物学研究，见表1；（5）多态性SSR分子标记应用：运用本研究获得的多态性SSR分子标记在8个濒危羊踯躅自然居群，含193个个体，进行了遗传多样性分析，获得了一些保护濒危羊踯躅的科学依据，即濒危羊踯躅Shannon多样性指数I为1.768，基因多样性指数H为0.777，江西省金溪县居群的遗传变异最丰富，而福建政和的遗传多样性水平最低，见表2，PCA分析和UPGMA分析都表明8个自然群体被分为两组，江西永修居群独立为一组，羊踯躅以就地保护为主，应优先保护金溪、永修居群，同时增加对政和和京山居群的保护权重；表1濒危羊踯躅16对多态性引物序列特征及其在个自然居群中的遗传特性 *表示显著偏离哈德温伯定律;F:正向引物;R:反向引物;A:等位基因数;Ho:观测杂合度;He:期望杂合度；表2濒危羊踯躅8个自然居群的遗传多样性 。

全文数据：

权利要求：

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