申请/专利权人：深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院)

申请日：2020-12-31

公开（公告）日：2021-04-09

公开（公告）号：CN112626184A

主分类号：C12Q1/6858(20180101)

分类号：C12Q1/6858(20180101);C12Q1/6886(20180101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.04.27#实质审查的生效;2021.04.09#公开

摘要：本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测MGMT基因启动子甲基化状态的方法。该检测方法包括以下步骤：提取样本中的DNA；将DNA通过重亚硫酸盐处理，并纯化回收；以重亚硫酸盐处理的DNA为模板，利用SEQIDNO.1‑2所示引物进行PCR扩增；将PCR扩增产物进行虾碱性磷酸酶反应；将碱性磷酸酶反应产物进行转录酶切反应，并树脂纯化；将树脂纯化产物进行核酸飞行时间质谱的分析，根据是否出现甲基化峰判断是否出现，判断是否出现甲基化，通过计算甲基化峰值与未甲基化峰值的比值，计算甲基化水平。本发明的检测方法具备了操作简单，检测周期短，通量高，特异性高以及低污染风险等优势。

主权项：1.一种检测MGMT基因启动子甲基化状态的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取样本中的DNA；S2、将DNA通过重亚硫酸盐处理，并纯化回收；S3、以重亚硫酸盐处理的DNA为模板，进行PCR扩增；PCR反应的体系为：模板：2-2.1μl；HPLC-gradewater：2.82-2.84μl；10×PCRbufferwith20mMMgCl2：0.98-1.02μl；25mMdNTP：0.08-0.09μl；5UuL的HotStarTaqPolymeraseEnzyme：0.07-0.08μl；1uM的上、下游引物各2μl；总体积为8.00μl；S4、将PCR扩增产物进行虾碱性磷酸酶反应；S5、将碱性磷酸酶反应产物进行转录酶切反应，并树脂纯化；S6、将树脂纯化产物进行核酸飞行时间质谱的分析，根据是否出现甲基化峰，判断是否出现甲基化，通过计算甲基化峰值与未甲基化峰值的比值，计算甲基化水平。

全文数据：

权利要求：

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