申请/专利权人：艾尔斯(浙江)医学科技有限公司

申请日：2021-01-22

公开（公告）日：2021-04-13

公开（公告）号：CN112646771A

主分类号：C12N5/071(20100101)

分类号：C12N5/071(20100101);C12R1/91(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.04.14#授权;2021.04.30#实质审查的生效;2021.04.13#公开

摘要：本发明实施例公开了一种人类卵泡卵丘细胞或和壁颗粒细胞的细胞系及其制备方法，包括：将人类卵泡卵丘细胞或和壁颗粒细胞分别进行第一离心获得第一固体；将梯度离心培养液加入到第一固体中，第二离心后分成三层，取所述三层的中间层加入磷酸盐缓冲液第三离心获得第三固体，后加入透明质酸酶溶液、裂解缓冲液，第四离心获得第四固体加入磷酸盐缓冲液第五离心获得纯化细胞，加入培养液中传代培养获得人类卵泡卵丘细胞或和壁颗粒细胞的细胞系；培养液按体积份数计包括：α‑MEM或DMEM100份；胎牛血清5‑15份；青链霉素0.5‑1.5份；促卵泡生长激素0.012‑0.02份；成功获得人类卵泡卵丘细胞或和颗粒细胞的细胞系。

主权项：1.一种人类卵泡卵丘细胞或和壁颗粒细胞的细胞系的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将人类卵泡卵丘细胞或和所述壁颗粒细胞分别进行第一离心以固液分离，获得第一固体；将浓度为75-85％梯度离心培养液和浓度为35-45％梯度离心培养液依次加入到所述第一固体中，第二离心后分成三层，取所述三层的中间层，获得第二固体；将所述第二固体加入磷酸盐缓冲液进行第三离心以固液分离，获得第三固体；将所述第三固体加入透明质酸酶溶液进行消化，后加入裂解缓冲液裂解，再进行第四离心以固液分离，获得第四固体；将所述第四固体加入磷酸盐缓冲液进行第五离心以固液分离，获得纯化细胞；将所述纯化细胞加入培养液中进行传代培养，获得人类卵泡卵丘细胞或和壁颗粒细胞的细胞系；其中所述培养液按体积份数计包括：α-MEM或者DMEM100份；胎牛血清5-15份；青链霉素混合液0.5-1.5份；促卵泡生长激素0.012-0.02份。

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