申请/专利权人：中南大学

申请日：2017-12-14

公开（公告）日：2021-05-04

公开（公告）号：CN107915768B

主分类号：C07J63/00(20060101)

分类号：C07J63/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.05.04#授权;2018.05.11#实质审查的生效;2018.04.17#公开

摘要：本发明涉及天然产物分离提纯技术领域，特别涉及一种从甜茶老叶中提取分离木栓酮的方法，包括以下制备步骤：1以甜茶老叶为原料，干燥脱水后粉碎，得到茶叶粉末；2取步骤1若干茶叶粉末加入到95％乙醇中恒温浸提；经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液；3将步骤2提取液减压浓缩至无醇味，得甜茶老叶乙醇提取物浸膏；4将步骤3浸膏分散在蒸馏水中，用等量的石油醚萃取三次。合并石油醚萃取相，减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚相萃取物；5取步骤4石油醚相萃取物经硅胶柱层析，使用一定体积比石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集有效馏分；6将步骤5有效馏分减压浓缩蒸去溶剂，经重结晶、干燥，得木栓酮纯品。本发明所述的提取分离纯化木栓酮的方法简便易行分离效率高、能耗低、污染少，为甜茶老叶利用开辟了一条新的途径。

主权项：1.一种从甜茶老叶中分离提纯木栓酮的方法，包括以下步骤：1以甜茶老叶为原料，干燥脱水后粉碎，得到茶叶粉末；2取步骤1若干茶叶粉末加入到95％乙醇中恒温浸提；经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液；3将步骤2提取液减压浓缩至无醇味，得甜茶老叶乙醇提取物浸膏；所述步骤3减压浓缩温度为42～45℃，乙醇可以回收进行下一次提取；4将步骤3浸膏分散在蒸馏水中，用等量的石油醚萃取三次；合并石油醚萃取相，减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚相萃取物；5取步骤4石油醚相萃取物经硅胶柱层析，使用一定体积比石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集有效流分；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为15～10：1；6将步骤5有效流分减压浓缩蒸去溶剂，得到木栓酮粗品；粗品再经重结晶、干燥后得白色晶体，即为木栓酮纯品；所述步骤4乙醇提取液浸膏与分散用蒸馏水用量为30g：100～120mL，萃取用石油醚用量与蒸馏水用量相同，石油醚可以回收进行下一次萃取。

全文数据：一种从甜茶老叶中分离提纯木栓酮的方法技术领域[0001]本发明涉及天然产物分离提纯技术领域，主要涉及一种从甜茶老叶中提纯木栓酮的方法。背景技术[0002]木栓酮Friedelin是一种典型的三萜类化合物，属于木栓烷型五环三萜，为白色针状结晶，熔点263_263.5°C,能溶于氯仿、石油醚等有机溶剂，不溶于水。木栓酮具有广泛的生物活性和医疗应用，如抗炎、镇痛、抗氧化、自由基清除以及良好的抑制致病细菌和真菌作用。木栓酮还具有杀虫作用，可以应用于植物保护。木栓酮存在许多植物中，如卫矛科植物卫矛的全草，大戟科植物重阳木的茎，石蕊科植物雀儿石蕊的枝状体等植物。[0003]甜茶，又名“木姜叶柯”、“观音茶”，属于壳斗科木姜叶柯属（LithocarpuslitseifoliusHanceChun植物。甜茶是一种集食、茶、糖、药四种功能的珍贵野生资源植物，多生长在常绿阔叶林，高山坡杂木林、灌丛、松栎林中，是一种生长能力和适应性很强的植物，尤以湖南和江西省资源丰富而集中。经现代科学证明，甜茶具有降低血糖、抗过敏、抗氧化、抗菌、改善记忆等功能。而且其富含天然甜味物质三叶苷Trilobatin，是天然甜味剂的理想资源，具有重要的实用价值。但由于制作成品甜茶叶只需要抽芽不久的嫩叶，大量叶龄较大的老叶得不到利用。[0004]本发明从如何对甜茶老叶资源利用角度进行研宄，尤其对老叶中含有的天然活性产物进行研究。在此过程中，首次从甜茶老叶中提取分离出木栓酮Friedelin。而且本发明所述的提取分离纯化方法系统规范，非常适合于甜茶老叶中木栓酮的提取分离，分离效率高、能耗低、污染少，为甜茶老叶利用开辟了一条新的途径。[0005]以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。发明内容[0006]本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种甜茶老叶利用的方法，该方法能通过提取废弃的甜茶老叶中的天然活性物质，获得更高的产业附加值以及资源再利用率。[0007]为了解决上述问题，本发明提出的技术方案为：[0008]采用溶剂提取的方法，提取甜茶老叶中的活性成分，并通过萃取，硅胶柱层析，重结晶一系列分离提纯方法，得到天然活性物质木栓酮。甜茶老叶中木栓酮的提取分离纯化具体步骤如下：[0009]⑴以甜茶老叶为原料，干燥脱水后粉碎，得到茶叶粉末。[0010]2取步骤（1若干茶叶粉末加入到95%乙醇中恒温浸提;经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液。[0011]3将步骤⑵提取液减压浓缩至无醇味，得甜氽老叶乙醇fe取物反賞。[0012]4将步骤3浸膏分散在蒸馏水中，用等量的石油醚萃取三次。合并石油醚萃取相，减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚相萃取物。[0013]5取步骤4石油醚相萃取物经硅胶柱层析，使用一定体积比石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集有效馈分。[0014]6将步骤5有效馏分减压浓缩蒸去溶剂，得到木栓酮粗品。粗品再经重结晶、干燥后得白色晶体，即为木栓酮纯品。[0015]优选地，上述的木栓酮溶剂提取方法，步骤（1中的所述茶叶粉末尺寸为60〜200目。[0016]优选地，上述的木栓酮溶剂提取方法，步骤⑵中的所述茶叶粉末与95%乙醇水溶液的料液比为lg:6〜8mL质量和体积比）；浸提温度为35〜40°C;浸提时间为20〜24h。[0017]优选地，上述的木栓酮溶剂提取方法，步骤⑷中乙醇提取液浸膏与分散用蒸馏水用量约为30g:100〜120mL，萃取用石油醚用量与蒸馏水用量相同。[0018]优选地，上述的木栓酮溶剂提取方法，步骤⑸的所述石油醚和乙酸乙酯体积比为15〜10:1，所述有效馏分液为经检测含有木栓酮的馏分液。[0019]优选地，上述的木栓酮溶剂提取方法，步骤6中的所述重结晶的具体步骤为:边滴加石油醚边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，得澄清的滤液，在0-5°C的条件下将澄清的滤液静置，使其重结晶，以获得木栓酮纯品。[0020]与现有技术相比，本发明的优点和特点在于：[0021]1本发明原料是叶龄超过九个月不能制成茶叶的甜茶老叶，属于废弃天然产物再利用；[0022]2本发明采用石油醚、乙酸乙酯和乙醇进行提取分离纯化，经济低毒且可以回收溶剂；[0023]⑶本发明只需一次柱层析分离即可以得到纯度较高的木栓酮粗品，更节约溶剂；[0024]⑷本发明所需设备简单，操作简明，易于实现工业化生产。具体实施方式[0025]为了便于理解本发明，下文将利用较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。[0026]除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。[0027]除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购头得到或者可通过现有方法制备得到。[0028]实施例1:[0029]一种从甜茶老叶中提取木栓酮的方法，包括以下步骤：_〇]⑴将150g茶叶粉末放入2000mL的圆底烧瓶中，加入900此的95%乙醇，在4rc条件下恒温浸提24h;经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液。'、[0031]⑵将步骤⑴提取液减压浓缩蒸去乙醇，得到37.72g浸膏。[0032]3将步骤2浸膏分散在200mL蒸馏水中，加入200mL石油醚萃取分层，共萃取三次，合并萃取相，再减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚萃取相浸膏2.13g。’’、一[0033]⑷将步骤⑶石油醚萃取相进行桂胶柱层析，使用乙酸乙酯:石油醚=1.15〜1〇进行梯度洗脱，得有效镏分。^[0034]5将步骤4有效馏分减压蒸发除去其中的石油醚和乙酸乙酯，边滴加石油酿边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，在TC的条件下冷却后，得白色晶体53mg，即木栓酮。^'[0035]实施例2:t〇〇36]一种从甜茶老叶中提取木栓酮的方法，包括以下步骤：[0037]⑴将200g茶叶粉末放入2000tnL的圆底烧瓶中，接着加入1300此的95%乙醇，在4〇°C条件下恒温浸提24h;经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液。’[0038]⑵将步骤⑴提取液减压浓缩蒸去乙醇，得到49.31g浸膏。[0039]⑶将步骤⑵浸膏分散在200mL蒸馏水中，加入200mL石油醚萃取分层，共萃取三次，合并萃取相，再减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚萃取相浸膏2.76g。[0M0]4将步骤⑶石油醚萃取相进行硅胶柱层析，使用乙酸乙酯：石油醚=1:15〜1〇进行洗脱，得有效馏分。[0041]5将步骤4有效馏分减压蒸发除去其中的石油醚和乙酸乙酯，边滴加石油醚边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，在0°C的条件下冷却后，得白色晶体67mg，即木栓酮。[0042]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而己，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

权利要求：1.一种从甜茶老叶中分离提纯木栓酮的方法，其特征在于，该方法只需一次柱层析分离即可以得到木栓酮粗品，所需设备简单，操作简明。2.—种如权利要求1所述的从老甜茶叶中分离提纯木栓酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：1以甜茶老叶为原料，干燥脱水后粉碎，得到茶叶粉末。2取步骤（1若千茶叶粉末加入到95%乙醇中恒温浸提;经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液。3将步骤⑵提取液减压浓缩至无醇味，得甜茶老叶乙醇提取物浸膏。4将步骤3浸膏分散在蒸馏水中，用等量的石油醚萃取三次。合并石油醚萃取相，减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚相萃取物。5取步骤4石油醚相萃取物经硅胶柱层析，使用一定体积比石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集有效馈分。03将步骤5有效馏分减压浓缩蒸去溶剂，得到木栓酮粗品。粗品再经重结晶、千燥后得白色晶体，即为木栓酮纯品。3.根据权利要求2所述的提纯方法，其特征在于，所述的所述步骤（1茶叶干燥方式为自然风千，粉碎至60〜200目。4.如权利要求2所述的提纯方法，其特征在于:所述步骤2老甜茶叶粉末与95%乙醇料液比为1g:6〜8mL，恒温浸提温度为35〜40°C，提取三次，每次浸提时间为20〜24h。5.如权利要求2所述的提纯方法，其特征在于:所述步骤3减压浓缩温度为42〜45°C，乙醇可以回收进行下一次提取。6.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于:所述步骤4乙醇提取液浸膏与分散用蒸馏水用量约为30g:1〇〇〜120mL，萃取用石油醚用量与蒸馏水用量相同，石油醚可以回收进行下一次萃取。7.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于:所述步骤5中，拌硅胶柱层析所用硅胶目数为200〜300目，木栓酮主要富集于极性较小石油醚乙酸乙酯混合液洗脱部分。8.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于:所述步骤6中，可以进行多次重结晶以获得纯度更高的木栓酮。

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