申请/专利权人：哈尔滨工业大学

申请日：2020-09-16

公开（公告）日：2021-11-05

公开（公告）号：CN112226464B

主分类号：C12N15/89(20060101)

分类号：C12N15/89(20060101);C12N15/877(20100101);A01K67/027(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.11.05#授权;2021.02.02#实质审查的生效;2021.01.15#公开

摘要：本发明属于基因工程领域，提供了一种新冠病毒人源化受体hACE2小鼠模型的构建方法及应用。本发明为了获得一种可用于新冠病毒致病机理、药物及疫苗研发的动物模型，以mTmG小鼠作为实验动物，利用CRISPRCas9基因编辑技术，通过将3’端带有polyA序列的人的血管紧张素转换酶hACE2的CDS序列插入到小鼠内源血管紧张素转换酶mACE2起始密码子之前的方法，获得了一种可红‑绿荧光转换的新冠病毒人源化受体hACE2小鼠模型，该模型解决了hACE2随机插入及小鼠内源ACE2蛋白表达的问题，并且能够实现对病毒感染过程的跟踪、定位和检测，可极大方便后续的研究和应用。

主权项：1.一种新冠病毒人源化受体hACE2小鼠模型的构建方法，其特征在于，方法如下:1gRNA的设计：在小鼠血管紧张素转换酶mACE2基因第二外显子起始密码子ATG附近设计2个gRNA位点，分别gRNA-1和gRNA-2，所述gRNA-1序列如SEQIDNo.1所示，所述gRNA-2序列如SEQIDNo.2所示；2DonorDNA的设计：将人源血管紧张素转换酶hACE2的上游同源臂、人源血管紧张素转换酶hACE2的CDS序列、polyA序列和人源血管紧张素转换酶hACE2的下游同源臂连接作为DonorDNA片段；3显微注射：将步骤1获得的2个gRNA、步骤2获得的DonorDNA、Cas9蛋白及Microinjectionbuffer混合，注射到mTmG小鼠受精卵的原核中，得到胚胎；4胚胎移植：将步骤3获得的胚胎继续培养至2-细胞后，再将2-细胞胚胎移植到假孕母鼠的输卵管中，直至仔鼠出生；5基因型鉴定：对步骤4）获得仔鼠的基因型进行鉴定，带有人源血管紧张素转换酶hACE2基因序列的仔鼠即为新冠病毒人源化受体hACE2小鼠模型。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 哈尔滨工业大学 一种新冠病毒人源化受体hACE2小鼠模型的构建方法及应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD