申请/专利权人：南京鼓楼医院

申请日：2021-08-16

公开（公告）日：2021-11-12

公开（公告）号：CN113633606A

主分类号：A61K9/00(20060101)

分类号：A61K9/00(20060101);A61K35/32(20150101);A61K33/00(20060101);A61K47/32(20060101);A61K47/42(20170101);A61P29/00(20060101);A61P19/04(20060101);A61M37/00(20060101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.11.30#实质审查的生效;2021.11.12#公开

摘要：本发明提供一种专用于治疗末端病的载有纳米马达驱动外泌体微针的制备方法，首先从跟腱中提取出肌腱干细胞外泌体，再通过2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱原位聚合包裹外泌体后接枝L‑精氨酸，即可得到纳米马达驱动的外泌体；将其与甲基丙烯酸酰化明胶和聚乙烯醇混合后共同加入微针模板中，最终制得载有纳米马达驱动外泌体微针，并将其应用于制备治疗末端病药物中。载有纳米马达驱动外泌体微针以反应产生的一氧化氮气体作为外泌体的驱动力，结合纳米马达向pH值降低的损伤部位趋附的性质，将微针内滞留在表皮层中的外泌体递送至受损的肌腱部位，结合一氧化氮气体的抗炎作用，有效地提高了末端病的治疗效果。

主权项：1.一种专用于治疗末端病的载有纳米马达驱动外泌体微针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、肌腱干细胞外泌体的提取：取跟腱并剪碎，加入I型胶原酶，在37℃的条件下充分消化跟腱，得到消化液，经过滤、离心，加入完全培养基，反复吹打、混合均匀后，得到悬浮液；将悬浮液倒入干细胞培养基中培养肌腱干细胞后，收集培养基中的液体，经过离心纯化收集到的液体，得到肌腱干细胞外泌体，并将肌腱干细胞外泌体分散重悬于磷酸盐缓冲液中；S2、纳米马达中间体的制备：将2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱加入磷酸盐缓冲液中，混合至均一溶液，向均一溶液中加入N,N’-双丙烯酰胱胺和二甲基丙烯酸甘油酯的混合物作为交联剂，随后向上述混合溶液中加入过硫酸铵和四甲基乙二胺，在4℃条件下静置1h，结束后振荡并重悬于磷酸盐缓冲液中，得到纳米马达中间体溶液；S3、纳米马达驱动的外泌体的制备：将步骤S1中的外泌体溶液加入步骤S2制得的纳米马达中间体溶液中，混合均匀后，在室温下放置1h；随后向其中加入L-精氨酸，反应2h后制得纳米马达驱动的外泌体；S4、载有纳米马达驱动的外泌体微针制备：将步骤S3制得的纳米马达驱动的外泌体与甲基丙烯酸酰化明胶和聚乙烯醇共同加入磷酸盐缓冲液中得到混合液；然后将混合液加入微针模板中填满模板内部，去除微针模板内的气泡，刮去多余的混合液，紫外固化15～60s；混合液固化后再加入透明质酸溶液，去除微针模板内的气泡，并在室温下干燥固化；脱模后即得到载有纳米马达驱动的外泌体微针。

全文数据：

权利要求：

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