申请/专利权人：福建医科大学

申请日：2018-07-10

公开（公告）日：2022-03-18

公开（公告）号：CN108837009B

主分类号：A61K36/716(20060101)

分类号：A61K36/716(20060101);A61P19/02(20060101);A61P29/00(20060101);A61K125/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.03.18#授权;2018.12.14#实质审查的生效;2018.11.20#公开

摘要：本发明涉及一种畲药十二时辰的提取物FrB4及其制备方法和运用。提取物FrB4采用以下方法制得：以畲药十二时辰为原料，利用极性溶剂对畲药十二时辰进行浸渍提取，接着依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，得总皂苷提取物，之后总皂苷提取物采用微孔树脂MCI柱层析分离，以甲醇‑水作为洗脱液进行梯度洗脱，收集质量分数为70％的甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4，该提取物FrB4在治疗类风湿性关节炎方面具有显著作用，可用于研制安全、有效、可控的中药抗炎、抗风湿新药。精制的提取物FrB4可用于制备各种剂型的药物，具有检测方便、服用剂量小、服用方便等优点。

主权项：1.一种重瓣铁线莲提取物FrB4的应用，其特征在于：在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用；所述重瓣铁线莲的提取物FrB4的制备方法，它包括以下步骤：（1）浸渍提取物的制备：以重瓣铁线莲为原料，利用极性溶剂对重瓣铁线莲进行浸渍提取，得浸渍提取物；（2）粗提取液的制备：将浸渍提取物分散于水中，得粗提取液；（3）总皂苷提取物的制备：将粗提取液依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，之后合并正丁醇萃取液，减压蒸馏除去正丁醇，得总皂苷提取物；（4）提取物FrB4的制备：将总皂苷提取物采用微孔树脂MCI柱层析分离，以甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，收集质量分数为70%的甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4；其中，步骤（1）的具体操作方法为：以重瓣铁线莲为原料，将重瓣铁线莲粉碎后，按重量体积比加入6~8倍的甲醇或乙醇浸渍提取，共提取3次，每次7天，之后，合并提取液，回收溶剂，得浸渍提取物；步骤（2）的具体操作方法为：将浸渍提取物分散于按重量体积比1~5倍的水中，得粗提取液；步骤（3）的具体操作方法为：将粗提取液先用石油醚萃取3次，收集水相；接着水相再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇后得总皂苷提取物；步骤（4）的具体操作方法为：将总皂苷提取物进行微孔树脂MCI柱层析，依次以水、20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇为洗脱液，进行梯度洗脱，收集70%甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。

全文数据：_种畲药十二时辰的提取物FrB4及其制备方法和运用技术领域[0001]本发明涉及一种畲药十二时辰的提取物FrB4及其制备方法和运用。背景技术[0002]类风湿性关节炎RheumatoidArthritis，RA是免疫反应介导的慢性炎症性自身免疫性疾病，是一种致残率极高的疾病，其患病率在结缔组织病中居于首位。据不完全统计，类风湿性关节炎在全球的发病率约1%，我国的发病率约〇.36%[1]。目前临床上使用的治疗RA的药物主要有：非甾体抗炎药NSAIDS、改善病情的抗风湿药DMARDs、糖皮质激素、生物制剂、靶向小分子药物[2]，但是，药物副作用或是经济原因，上述药物并没有成为治疗类风湿性关节炎的特效药，因此，基于治疗类风湿性关节炎的研究依然是医药学界亟待解决的问题。[0003]畲药十二时辰为毛茛科铁线莲属植物重瓣铁线莲（ClematisfloridaThumb.var.plenaD.Don的干燥块根，在福建宁德福安地区畲族少数民族中为常用药，在畲族医药中称其为“十二时辰”，在畲族地区长期应用于治疗跌打肿痛，各类炎症，有通经活络、祛风除湿、行气止痛的功效。目前对畲药十二时辰的研究报道很少，未见十二时辰提取物的提取、制备方法的报道;未见关于十二时辰有效成分与药理作用关系的报道。在民间，十二时辰通常直接以生药水煎或泡酒喝，存在提取效率低、服用不便、效果不稳定等问题。对于这一民族药，没有一个地方标准来载入提取方法，更没有检测指标定量控制药物质量。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种畲药十二时辰的提取物FrB4及其制备方法和其在类风湿性关节炎治疗上的运用。[0005]本发明的目的通过如下技术方案实现:一种畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，它包括以下步骤：[0006]1浸渍提取物的制备：以畲药十二时辰为原料，利用极性溶剂对畲药十二时辰进行浸渍提取，得浸渍提取物；[0007]2粗提取液的制备:将浸渍提取物分散于水中，得粗提取液；[0008]3总皂苷提取物的制备:将粗提取液依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，之后合并正丁醇萃取液，减压蒸馏除去正丁醇，得总皂苷提取物；[0009]⑷提取物FrB4的制备:将总皂苷提取物采用微孔树脂MCI柱层析分离，以甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，收集质量分数为70%的甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。[0010]由上述方法制得的提取物FrB4，经检测其主要成分为三萜皂苷，其中，三萜皂苷含量在90%左右。[0011]所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的应用，在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。[0012]经动物实验发现上述畲药十二时辰的提取物FrB4对实验性类风湿性关节炎有显著治疗作用，实验方法与结果如下：[0013]实验用SPF级大鼠，随机选择适宜只数作为正常对照组，其余弗氏完全佐剂造模成功后，分为模型对照组、阳性对照组、提取物FrB4高剂量组和提取物FrB4低剂量组。其中阳性对照药可为吲哚美辛、雷公藤多苷、甲氨蝶呤等临床治疗类风湿性关节炎的药物。灌胃给药适宜剂量，观测动物体重等一般情况，测定足趾容积、关节炎指数评分，测定炎性细胞因子水平，测定免疫器官指数，检查关节组织病理切片。统计学方法处理数据。结果显示:提取物FrB4可以剂量依赖性的降低关节炎指数，减小足趾容积，恢复大鼠体重增长，下调血清TNF-a、IL-li3、IL_6含量，降低免疫器官指数。大鼠踝关节组织切片HE染色后光镜下观察结果显示，此十二时辰的提取物FrB4能够减轻滑膜增生和炎细胞浸润表现出了较好的作用趋势。[00M]本发明中，药物制剂的制备:将上述提取物FrB4加入适当的辅料，可制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口含片、咀嚼片、分散片等固体剂型，凝胶剂等半固体剂型，也可以制备成口服液、合剂等液体剂型。[0015]较之现有技术而言，本发明的优点在于：用本发明提供的方法所得的提取物FrB4，在治疗类风湿性关节炎方面具有显著作用，可进一步用于研制安全、有效、可控的中药抗炎、抗风湿新药。精制的提取物FrB4可用于制备各种剂型的药物，具有检测方便、服用剂量小、服用方便、疗效高的优点，具有广阔的市场前景。附图说明[0016]图1是实施例3中，正常组、模型组、吲哚美辛组、十二时辰提取物FrB4治疗后AA大鼠踝关节病理切片图。具体实施方式[0017]下面结合说明书附图和实施例对本发明内容进行详细说明：[0018]一种提取物FrB4的制备方法，它包括以下步骤：[0019]1浸渍提取物的制备：以畲药十二时辰为原料，利用极性溶剂对畲药十二时辰进行浸渍提取，得浸渍提取物；[0020]2粗提取液的制备:将浸渍提取物分散于水中，得粗提取液；[0021]3总皂苷提取物的制备:将粗提取液依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，之后合并正丁醇萃取液，减压蒸馏除去正丁醇，得总皂苷提取物；[0022]⑷提取物FrB4的制备:将总皂苷提取物采用微孔树脂MCI柱层析分离，以甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，收集质量分数为70%的甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。[0023]所述极性溶剂为甲醇、乙醇或水中的一种或几种的混合物。[0024]其中，步骤（1的具体操作方法为：以畲药十二时辰为原料，将畲药十二时辰粉碎后，按重量体积比加入6〜8倍原料重的甲醇或乙醇浸渍提取，共提取3次，每次7天，之后，合并提取液，回收溶剂，得浸渍提取物。[0025]步骤2的具体操作方法为:将浸渍提取物分散于按重量体积比1〜5倍的水中，得粗提取液。[0026]步骤⑶的具体操作方法为:将粗提取液先用石油醚萃取3次，收集水相;接着水相再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇后得总皂苷提取物。[0027]步骤⑷的具体操作方法为:将总皂苷提取物进行微孔树脂MCI柱层析，依次以水、20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇为洗脱液，进行梯度洗脱，收集70%甲醇的洗脱部分Fr.B4，之后经减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。[0028]其中，所述的20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇以及90%甲醇，分别为质量分数为20%的甲醇水溶液、质量分数为50%的甲醇水溶液、质量分数为70%的甲醇水溶液、质量分数为90%的甲醇水溶液。[0029]以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述：[0030]实施例1:[0031]购自宁德福安畲草堂的十二时辰根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取20kg，加入150L甲醇浸渍提取，共提取3次，每次7天，合并提取液，减压回收甲醇，得由甲醇浸渍的浸渍提取物878g。[0032]将所得的浸渍提取物分散于1.2L水中，得粗提取液。[0033]将粗提取液先用石油醚萃取3次，每次1.2L，水相再用乙酸乙酯萃取3次，每次1.2L，萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次1.2L，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂后得到总皂苷提取物313.4g。[0034]将所得的总皂苷提取物进行微孔树脂MCI柱层析，依次以水、20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇为洗脱液，进行梯度洗脱，收集各洗脱剂的洗脱部分，其中，水的洗脱部分为Fr.Bl，20%甲醇的洗脱部分为Fr.B2，50%甲醇的洗脱部分为Fr.B3、70%甲醇的洗脱部分为Fr.B4、90%甲醇的洗脱部分为Fr.B5、甲醇的洗脱部分为Fr.B6;[0035]70%甲醇的洗脱部分Fr.B4，经减压回收溶剂，冷冻干燥后得棕黑色胶状物，该棕黑色胶状物即为所述的提取物FrB4,该提取物FrB4经称重为48.lg，之后经检测三萜皂苷的含量为90%。[0036]实施例2:[0037]购自宁德福安畲草堂的十二时辰根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取5kg，加入35L80%乙醇水溶液浸渍提取，共提取3次，每次7天，合并提取液，减压回收溶剂，得由乙醇水溶液浸渍的浸渍提取物222g。[0038]将所得的浸渍提取物分散于0.3L水中，得粗提取液。[0039]将粗提取液先用石油醚萃取3次，每次0.3L，水相再用乙酸乙酯萃取3次，每次0.3L，萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，每次0.3L，合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂后得到总皂苷提取物78.3g。[0040]将所得的总皂苷提取物进行微孔树脂MCI柱层析，依次以水、20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇为洗脱液，进行梯度洗脱，收集各洗脱剂的洗脱部分，其中，水的洗脱部分为Fr.Bl，20%甲醇的洗脱部分为Fr.B2，50%甲醇的洗脱部分为Fr.B3、70%甲醇的洗脱部分为Fr.B4、90%甲醇的洗脱部分为Fr.B5、甲醇的洗脱部分为Fr.B6;[0041]70%甲醇的洗脱部分Fr.B4,经减压回收溶剂，冷冻干燥后得棕黑色胶状物，该棕黑色胶状物即为所述的提取物FrB4,该提取物FrB4经称重为12.lg，之后经检测三萜皂苷的含量为89%。[0042]实施例3:[0043]1材料：[0044]1.1动物：[0045]SPF级SD大鼠，雄性，体质量180-220g，购自福建医科大学实验动物中心，生产许可证号SCXK闽）2016-0002,实验方案经福建医科大学实验动物伦理委员会批准，饲养温度22-23°C，实验动物使用许可证:SYXK闽）2016-0006。[0046]1.2药物及试剂：[0047]十二时辰药材购自福建省宁德市福安畲草堂。本实验所用十二时辰提取物FrB4由本实验室制备，提取物FrB4为根据实施例1所述方法得到的十二时辰三萜皂苷提取物FrB4。吲哚美辛，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，含量99%，批号:Cl723020。[0048]弗氏完全佐剂CompleteFreund’sAdjuvant，CFA，购自安诺伦北京生物科技有限公司；大鼠TNF-a、IL-6、IL_li3酶联免疫检测试剂盒，购自杭州联科生物技术股份有限公司；通用型组织固定液，购自武汉塞维尔生物科技有限公司。[0049]1.3仪器：[0050]YLS-7C足趾容积测量仪江苏赛昂斯生物科技有限公司），MultiskanGo全波长酶标仪（ThermoScientific，TGL-16G离心机（上海安亭科学仪器厂），AR124CN电子天平CorningIncorporated，USA，电子分析天平上海奥豪斯仪器有限公司），FD-2系列冷冻干燥机北京博医康实验仪器有限公司），BC-2800Vet全自动动物血液细胞分析仪迈瑞医疗国际有限公司），TS-100脱色数显摇床海门市其林贝尔仪器制造有限公司），移液枪上海麦尚科学仪器有限公司）。[0051]2方法：[0052]2.1模型构造：[0053]造模大鼠经戊巴比妥钠40mg·kg，麻醉后，右后足趾常规消毒，皮下注射0.ImL弗氏完全佐剂。[0054]每周测一次足趾肿胀容积，并观察记录四肢关节的红肿范围和程度。根据以下标准对关节的肿胀范围与程度做出关节炎指数Al评分。0分:正常，无症状。1分:踝出现轻微红斑、肿胀。2分:踝关节及跗骨出现红斑和肿胀。3分:踝关节至跖骨处或掌关节出现红斑和中度肿胀。4分:踝关节至跖骨处严重肿胀和红斑，且不能负重。四肢分别评分，累计每只大鼠四肢关节的AI最高得分为16分。AlM即为造模成功。[0055]2.2动物分组与给药：[0056]SD大鼠30只，适应性饲养5天后，随机分为5组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组（剛哚美辛）、十二时辰提取物FrB4高剂量组、十二时辰提取物FrB4低剂量组。除正常对照组外，其余各组均造模。造模成功后分别灌胃给药，每天一次。受试药物用0.1%CMC-Na混悬，给药体积为ImL·100g_1。正常对照组与模型对照组给0.1%CMC-Na，十二时辰提取物FrB4高、低剂量分别为200、50mg·kg'吲哚美辛组为5mg·kg一、[0057]2.3观察指标与检测方法：[0058]2.3.1动物一般情况及体重测量，观察记录给药前后大鼠的行为活性与一般状况，每周称体重一次。[0059]2.3.2关节炎指数评定每周测定1〜2次，依据上述关节炎指数评分标准，对各鼠的关节炎病变程度进行评定。[0060]2.3.3足趾容积的测定，造模之前测一次，造模后每周一次，并根据以下公式计算大鼠足趾肿胀度AV:[0061]大鼠足趾肿胀度=造模后足趾容积-造模前足趾容积；[0062]2.3.4炎性细胞因子水平测定，实验结束时，眼眶取血。所采集的血液静置30min后，3000rpm离心30min，分离血清，采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术ELISA按照试剂盒操作要求与步骤测定血清中肿瘤坏死因子TNF-α、白介素-6IL-6、白介素-IIL-1β的含量。[0063]2.3.5免疫器官指数测定，实验结束时，称量大鼠体重，麻醉后处死，取出胸腺和脾脏称重，并按照以下公式计算胸腺指数和脾脏指数。[0064]胸腺或脾脏指数=胸腺或脾脏mg体重gXIO3;[0065]2.3.6关节组织病理学检查，实验结束时，从足踝上0.5cm处剪取大鼠右后足关节，通用型组织固定液中固定24小时。经脱钙、石蜡包埋、切片、苏木素-伊红HE染色，并在光学显微镜下比较观察各组关节的病变程度。[0066]2.4统计学处理：[0067]采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析ANOVA，实验结果均以：表示，P〇.05。见表1。[0071]表1.各组对CFA诱导型关节炎大鼠体重增长的影响（[0072][0073]注:与模型对照组比较，*:?0.05，**:?0.01;与正常对照组比较，+:?0.05，++:?0.01。3.2关节炎指数评定结果：[0074]关节炎指数结果显示，CFA免疫后11-15天后炎症症状达到高峰期，随着时间的变化，炎症症状有所减轻。与模型组相比：吲哚美辛组在免疫21天可显著降低关节炎指数P0.05，并且随着给药时间的延长，表现出持续稳定的作用效果;提取物FrB4高剂量组在免疫17天给药8天表现出显著降低抗炎指数的作用效果P0.05，免疫25天时，作用效果增强P〇.01;提取物FrB4低剂量组在免疫25天给药16天）后关节炎指数明显降低P0.01。见表2。[0075]表2.各组对CFA诱导型关节炎大鼠关节炎指数Al的影响[0076][0077]注:与模型对照组比较，*:Ρ0·05，#:Ρ0·01。[0078]3.3足容积测定结果：[0079]采用药物治疗的各组，足容积均有不同程度的下降趋势。吲哚美辛组在免疫15天给药6天足趾肿胀程度有明显降低Ρ〈0.05，随着给药次数的增多，在免疫28天给药19天后抑制足趾肿胀程度的作用更明显Ρ〈〇.01;提取物FrB4高剂量组在免疫15天给药6天）后对足趾肿胀程度的抑制作用已经很明显P〈〇.01，随着给药次数的增加，表现为持续、稳定减轻足趾肿胀程度的作用;提取物FrB4低剂量组在免疫28天给药19天后对大鼠的足趾肿胀程度也表现出明显的抑制作用P〈〇.05。见表3。[0080]表3.各组对CFA诱导型关节炎大鼠足趾肿胀容积的影响（[0081][0083]注:与模型对照组比较，*:Ρ0·05，**:Ρ0·01。[0084]3.4免疫器官指数测定结果：[0085]胸腺和脾脏是两个重要的免疫器官，能反应机体整体免疫功能状态。AA免疫发生后，大鼠的胸腺和脾脏指数明显增加P〈〇.05。但经药物治疗后，与模型组相比，提取物FrB4高剂量组可明显降低AA大鼠的胸腺指数和脾脏指数P〈0.05，结果表明十二时辰提取物FrB4对实验性类风湿性关节炎具有一定的免疫抑制作用。见表4。[0086]表4.免疫器官指数测定结果（[0087][0088]注:与模型对照组比较，*:Ρ0·05，**:Ρ0·01。[0089]3.5血清炎性细胞因子测定结果：[0090]正常对照组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-Ιβ的含量都较低，模型组中大鼠血清中IL-Ιβ、IL-6、TNF_a含量均有不同程度的升高，但经药物治疗后，与模型组相比，各用药组上述三种炎性细胞因子的含量均出现不同程度的下降，尤其是吲哚美辛组和提取物FrB4高剂量组，表现出明显降低IL-lf3、IL-6、TNF_a含量的作用。见表5。[0091]表5.药物对CFA诱导型关节炎大鼠血清炎性细胞因子的影响（[0092][0094]注:与模型对照组比较，*:?0.05，#:?0.01;与正常对照组比较，+:?0.05，++:P0.01。3.6关节组织病理学检查结果[0095]取大鼠踝关节组织切片，HE染色后光学倒置显微镜下观察，正常大鼠滑膜由1〜2层滑膜细胞组成且部分不连续，滑膜衬里下层为均匀分布的脂肪细胞和血管，未见炎性细胞浸润;关节软骨表面光滑，关节间隙正常，未见软骨及骨质破坏。经CFA免疫的大鼠均可见不同程度的滑膜及软骨病变，其中模型组的病变程度最为严重，表现为滑膜异常增生，上皮细胞层增厚且排列杂乱，衬里下层炎性细胞浸润，软骨表面粗糙，软骨组织受损。与模型组相比，经药物治疗的各组，大鼠关节炎的病变程度均表现出不同程度的减轻状态。吲哚美辛对减轻AA大鼠的关节病变程度具有明显的作用，提取物FrB4在减轻滑膜增生、炎性细胞浸润以及软骨损伤方面表现出较好的作用趋势，如图1所示，图1是实施例3中，正常组、模型组、吲哚美辛组、十二时辰提取物FrB4治疗后AA大鼠踝关节病理切片图。其中，A为正常组，HEX100;B为模型组，HEX100;C为吲哚美辛组，HEX100;D为十二时辰提取物FrB4低剂量组，HEX100;E为十二时辰提取物FrB4高剂量组，HEX100。[0096]最后，上述实施例仅是为清楚说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定，对于所述领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可作出其他不同形式的变动，而由此引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

权利要求：1.一种畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于:它包括以下步骤：1浸渍提取物的制备：以畲药十二时辰为原料，利用极性溶剂对畲药十二时辰进行浸渍提取，得浸渍提取物；⑵粗提取液的制备:将浸渍提取物分散于水中，得粗提取液；3总皂苷提取物的制备：将粗提取液依次用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，之后合并正丁醇萃取液，减压蒸馏除去正丁醇，得总皂苷提取物；⑷提取物FrB4的制备:将总皂苷提取物采用微孔树脂MCI柱层析分离，以甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，收集质量分数为70%的甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。2.根据权利要求1所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于:所述极性溶剂为甲醇、乙醇或水中的一种或几种的混合物。3.根据权利要求1所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于：步骤1的具体操作方法为：以畲药十二时辰为原料，将畲药十二时辰粉碎后，按重量体积比加入6〜8倍原料重的甲醇或乙醇浸渍提取，共提取3次，每次7天，之后，合并提取液，回收溶剂，得浸渍提取物。4.根据权利要求1所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于：步骤2的具体操作方法为:将浸渍提取物分散于按重量体积比1〜5倍的水中，得粗提取液。5.根据权利要求1所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于：步骤3的具体操作方法为:将粗提取液先用石油醚萃取3次，收集水相;接着水相再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取后的水相再用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇后得总阜苷提取物。6.根据权利要求1所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的制备方法，其特征在于：步骤4的具体操作方法为：将总皂苷提取物进行微孔树脂MCI柱层析，依次以水、20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇为洗脱液，进行梯度洗脱，收集70%甲醇的洗脱部分Fr.B4，减压浓缩、干燥，即得所述提取物FrB4。7.—种由权利要求1-6任意一项所述的方法制得的畲药十二时辰的提取物FrB4。8.根据权利要求7所述的畲药十二时辰的提取物FrB4的应用，其特征在于:在制备治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

百度查询： 福建医科大学 一种畲药十二时辰的提取物FrB4及其制备方法和运用

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