申请/专利权人：长沙学院

申请日：2021-01-21

公开（公告）日：2022-06-03

公开（公告）号：CN112782144B

主分类号：G01N21/64

分类号：G01N21/64;G01N27/447;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.06.03#授权;2021.05.28#实质审查的生效;2021.05.11#公开

摘要：本发明公开了一种基于DNA损伤修复缺陷活细胞彗星检测水体中有机污染物毒性的方法，首先采集水样富集物，将所述水样富集物处理DNA损伤修复缺陷活细胞TDP1KO和TDP2KO，同时以水样富集物处理的DNA损伤修复正常活细胞WT作为对照，结合单细胞凝胶电泳技术，分析测量DNA损伤修复缺陷活细胞和正常细胞的DNA慧星迁移尾矩值，用其评价水体中有机污染物的毒性。本发明的方法提高了水体中有机污染物的遗传毒性检测的灵敏度，能够检测到水中超微量的有机污染物，对环境污染危害健康的预警具有重要的意义，而且还可以从DNA损伤修复角度发掘水中有机污染物生物毒性的分子机制。

主权项：1.一种基于DNA损伤修复缺陷活细胞彗星检测水体中有机污染物毒性的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）采集水样富集物，将所述水样富集物处理DNA损伤修复缺陷活细胞，同时以所述水样富集物处理的DNA损伤修复正常活细胞作为对照；将上述处理的DNA损伤修复缺陷活细胞和正常活细胞分别离心沉淀，再用PBS重新悬浮细胞，离心得到第一细胞悬液，备用；所述DNA损伤修复缺陷活细胞由鸡B淋巴细胞DT40敲除DNA修复基因TDP1和或TDP2后得到；所述DNA损伤修复缺陷活细胞为TDP1KO细胞系或TPD2KO细胞系，所述TDP1KO细胞系由鸡B淋巴细胞DT40敲除TDP1基因上如SEQIDNO:1所示的基因片段后得到，所述TPD2KO细胞系由鸡B淋巴细胞DT40敲除TDP2基因上如SEQIDNO:2所示的基因片段后得到；（2）将所述步骤（1）处理后得到的第一细胞悬液制备成彗星电泳载玻片细胞样品；（3）将所述步骤（2）后得到的彗星电泳载玻片细胞样品去掉盖玻片，浸入碱性裂解液中进行细胞裂解，然后取出裂解后的载玻片，放入电泳槽电泳，电泳结束后将载玻片细胞样品进行中和处理；（4）中和完毕后在载玻片细胞样品上滴加DNA荧光染料，加盖盖玻片，用荧光显微镜观察慧星变化，测量经过所述水样富集物处理的DNA损伤修复缺陷活细胞和正常活细胞的慧星尾矩值，得到DNA慧星迁移尾矩值。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 长沙学院 一种基于DNA损伤修复缺陷活细胞彗星检测水体中有机污染物毒性的方法

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